操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱：FGFR抑制劑（NVP-BGJ398 phosphate）
英文名稱：NVP-BGJ398 phosphate
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg
產(chǎn)品貨號：BJ-01X8599
NVP-BGJ398(BGJ-398)磷酸鹽是FGFR抑制劑，對FGFR1，F(xiàn)GFR2和FGFR3的IC50分別為0.9，1.4和1nM，比對FGFR4和VEGFR2的抑制性高40倍，對Abl，F(xiàn)yn，Kit，Lck和Lyn幾乎無活性。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ ：1310746-10-1 別名：Infigratinib phosphate;BGJ-398 phosphate 純度：96.14% 分子量：658.47 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
人 SIVA1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽冰凍切片組織P38蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 APOC2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽石蠟切片組織P38蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 E2F2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽載玻片細(xì)胞P38蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 ELF4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽冰凍切片組織P38蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 USP49 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽石蠟切片組織P38蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
人 ALDH1B1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽細(xì)胞P38蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒 10/50 次
人 FKBP4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽細(xì)胞P38蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 10/50 次
人 DDOST 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽P38蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 5次
人 TUBB3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽P38蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 5次
人 BHMT 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽P38蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 25次
人 DUSP6 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽細(xì)胞PDGF-A蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 10/20次
FGFR抑制劑（NVP-BGJ398 phosphate）phospho-MEK1/MAP2K1(Thr292) 磷酸化絲裂原活化蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.1ml
UAP56/BAT1 ATP-依賴的RNA解旋p47抗體 規(guī)格: 0.1ml
TNFSF14 瘤壞死因子配體超家族成員14抗體 規(guī)格: 0.1ml
CCDC160 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白160抗體 規(guī)格: 0.2ml
Acetyl CoA Carboxylase 乙酰輔A羧化抗體 0.2ml
C Peptide C-肽抗體 規(guī)格: 0.1ml
HNF1/TCF1/HNF1A 肝細(xì)胞核因子1α抗體 規(guī)格: 0.2ml
NRAS 原基因N-Ras抗體 規(guī)格: 0.1ml
ANKRD12 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-human IgG/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
C9orf152 9號染色體開放閱讀框152抗體 規(guī)格: 0.2ml
G protein alpha Inhibitor 2 G蛋白α抑制蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
