產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:丙酮酸脫氫酶測試盒50管/48樣
檢測方法:可見分光光度法
產(chǎn)品分類:三羧酸循環(huán)系列
產(chǎn)品規(guī)格: 50管/48樣
檢測方法:可見分光光度法
產(chǎn)品貨號:BJ-01S9767
商品介紹:
測定意義: PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。 測定原理 PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原WST-8產(chǎn)生黃色物質(zhì),從而導(dǎo)致450nm光吸收的增加。 可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10) |
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
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注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。