細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
中文名稱：MET抑制劑（LY2801653 dihydrochloride）
英文名稱：LY2801653 dihydrochloride
產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
產品貨號：BJ-01X8069
LY2801653dihydrochloride是一種II型ATP競爭性的MET抑制劑，Ki值為2nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ ：1206801-37-7 別名：Merestinib dihydrochloride 純度：99.59% 分子量：625.45 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
人 COL9A3 基因全長ORF克隆人微管微絲交聯因子1(MACF1)免疫試劑盒進口、組裝
人 APLP1 基因全長ORF克隆人微管多特異性有機陰離子轉運蛋白2(ABCC3)免疫試劑盒進口、分裝
人 MOXD1 基因全長ORF克隆人微管多特異性有機陰離子轉運蛋白1(ABCC2)免疫試劑盒現貨供應
人 QSOX1 基因全長ORF克隆人微管蛋白,γ復合體關聯蛋白3(TUBGCP3)免疫試劑盒*直銷
人 MXRA8 基因全長ORF克隆人網膜素(omentin)免疫試劑盒進口、組裝
人 SCPEP1 基因全長ORF克隆人晚期氧化蛋白產物(AOPP)免疫試劑盒進口、分裝
人 RETSAT 基因全長ORF克隆人晚期糖基化終末產物受體(RAGE/AGER)免疫試劑盒現貨供應
人 CELA2A 基因全長ORF克隆人晚期糖基化終末產物(AGEs)免疫試劑盒*直銷
人 PRH1 基因全長ORF克隆人外顯肽(extein)免疫試劑盒進口、組裝
人 ESRP1 基因全長ORF克隆人唾液酸免疫試劑盒進口、分裝
人 TMPRSS12 基因全長ORF克隆人唾液酸(SA)免疫試劑盒現貨供應
MET抑制劑（LY2801653 dihydrochloride）核苷酸逆轉錄酶抑制劑(Tenofovir) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg Tenofovir1000U 核酸內切 IV Endonuclease IV -20℃保存
HCV replication抑制劑（R-1479） 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg R-14792 ug pSUMO pSUMO 低溫運輸，-20℃保存
大腸桿菌LpxC抑制劑(CHIR-090) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg CHIR-09010mL 非多糖清除劑（RNA專用） PS Erasol（RNA） 4℃保存
PI3K/Akt抑制劑(Miltefosine) 100mg|500mg|1g Miltefosine2 ug pCMV-Tag 2A pCMV-Tag 2A 低溫運輸，-20℃保存
模擬肽類抑制劑(Danoprevir) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg Danoprevir硝酸鹽肉湯 Nitrate Broth 250g
HCV抑制劑（Artemisinin） 1mL(10mM)|200mg|500mg Artemisinin100g 二氫鉀 Potassium Dihydrogen Phosphate 室溫保存
β-內酰胺酶抑制劑（Avibactam sodium hydrate） 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Avibactam sodium hydrate50T 沙門氏菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
蛋白合成抑制劑(Erythromycin) 1mL(10mM)|1g|5g|10g Erythromycin1 mg LY 294002（PI3K抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
逆轉錄酶抑制劑（Lamivudine） 1mL(10mM)|100mg|500mg Lamivudine250ml Glucose Veronal Buffer with EDTA(GVBE) Glucose Veronal Buffer with EDTA(GVBE) 常溫保存
NNRTI抑制劑(Delavirdine mesylate) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg Delavirdine mesylate5mL 雪旺細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
1，3-β-d葡聚糖合酶抑制劑(Caspofungin Acetate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg|500mg Caspofungin Acetate2 ug pIRES2-DsRed-Express pIRES2-DsRed-Express 低溫運輸，-20℃保存
