細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
中文名稱:MET抑制劑(LY2801653 dihydrochloride)
英文名稱:LY2801653 dihydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
產(chǎn)品貨號:BJ-01X8069
LY2801653dihydrochloride是一種II型ATP競爭性的MET抑制劑,Ki值為2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :1206801-37-7 別名:Merestinib dihydrochloride 純度:99.59% 分子量:625.45 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
人 COL9A3 基因全長ORF克隆人微管微絲交聯(lián)因子1(MACF1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
人 APLP1 基因全長ORF克隆人微管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運蛋白2(ABCC3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
人 MOXD1 基因全長ORF克隆人微管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運蛋白1(ABCC2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人 QSOX1 基因全長ORF克隆人微管蛋白,γ復(fù)合體關(guān)聯(lián)蛋白3(TUBGCP3)免疫試劑盒*直銷
人 MXRA8 基因全長ORF克隆人網(wǎng)膜素(omentin)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
人 SCPEP1 基因全長ORF克隆人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
人 RETSAT 基因全長ORF克隆人晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE/AGER)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人 CELA2A 基因全長ORF克隆人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)免疫試劑盒*直銷
人 PRH1 基因全長ORF克隆人外顯肽(extein)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
人 ESRP1 基因全長ORF克隆人唾液酸免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
人 TMPRSS12 基因全長ORF克隆人唾液酸(SA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
MET抑制劑(LY2801653 dihydrochloride)核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(Tenofovir) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg Tenofovir1000U 核酸內(nèi)切 IV Endonuclease IV -20℃保存
HCV replication抑制劑(R-1479) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg R-14792 ug pSUMO pSUMO 低溫運輸,-20℃保存
大腸桿菌LpxC抑制劑(CHIR-090) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg CHIR-09010mL 非多糖清除劑(RNA專用) PS Erasol(RNA) 4℃保存
PI3K/Akt抑制劑(Miltefosine) 100mg|500mg|1g Miltefosine2 ug pCMV-Tag 2A pCMV-Tag 2A 低溫運輸,-20℃保存
模擬肽類抑制劑(Danoprevir) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg Danoprevir硝酸鹽肉湯 Nitrate Broth 250g
HCV抑制劑(Artemisinin) 1mL(10mM)|200mg|500mg Artemisinin100g 二氫鉀 Potassium Dihydrogen Phosphate 室溫保存
β-內(nèi)酰胺酶抑制劑(Avibactam sodium hydrate) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Avibactam sodium hydrate50T 沙門氏菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
蛋白合成抑制劑(Erythromycin) 1mL(10mM)|1g|5g|10g Erythromycin1 mg LY 294002(PI3K抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(Lamivudine) 1mL(10mM)|100mg|500mg Lamivudine250ml Glucose Veronal Buffer with EDTA(GVBE) Glucose Veronal Buffer with EDTA(GVBE) 常溫保存
NNRTI抑制劑(Delavirdine mesylate) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg Delavirdine mesylate5mL 雪旺細(xì)胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
1,3-β-d葡聚糖合酶抑制劑(Caspofungin Acetate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg|500mg Caspofungin Acetate2 ug pIRES2-DsRed-Express pIRES2-DsRed-Express 低溫運輸,-20℃保存