"山梨醇麥康凱瓊脂添加劑
食品衛(wèi)生檢驗(yàn)培養(yǎng)基
1ml*5
每200mlHB0121培養(yǎng)基中添加1支(含頭孢克肟0.01mg和亞碲酸鉀0.5mg)
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多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟:
1、制備抗原。
2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
3、動(dòng)物免疫。
4、試取血進(jìn)行測(cè)試,看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫,殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
抗體結(jié)構(gòu):
抗體是具有4條多肽鏈的對(duì)稱結(jié)構(gòu),其中2條較長(zhǎng)、相對(duì)分子量較大的相同的重鏈(H鏈);2條較短、相對(duì)分子量較小的相同的輕鏈(L鏈)。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子。輕鏈有κ和λ兩種,重鏈有μ、δ、γ、ε和α五種。 整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。在給定的物種中,不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列。可變區(qū)位于""Y""的兩臂末端。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈,這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū)。高變區(qū)位于分子表面,zui多由17個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成,少則只有2 ~ 3個(gè)。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原抗原的特異性。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的,位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段(antigen-binding fragment, Fab)。""Y""的柄部稱結(jié)晶片段(crystalline fragment,FC),糖結(jié)合在FC 上。
蛋白質(zhì)與多肽的:
多肽:通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,道爾頓),能透過(guò)半透膜,不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽;由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì):生物體中廣泛存在的一類生物大分子,由核酸編碼的α氨基酸之間通過(guò)α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈,再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物。
就是:都是由20種基本氨基酸通過(guò)肽鍵連接而成的。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別:
蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡(jiǎn)寫為:C、H、O、N等元素→氨基酸→多肽(肽鏈)→蛋白質(zhì)。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個(gè)層次,區(qū)別如下:
①多肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級(jí)結(jié)構(gòu)形式,而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的,一個(gè)蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成(如高等動(dòng)物的細(xì)胞色素c是由104個(gè)氨基酸殘基的一條肽鏈組成),也可由多條肽鏈通過(guò)一定的化學(xué)鍵(肯定不是肽鍵,如二硫鍵、氫鍵等)連接而成(如胰島素由2條肽鏈組成、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等)。
②多肽與蛋白質(zhì)的功能有差異。多肽往往是無(wú)生物活性,而蛋白質(zhì)是具有生物活性的。多肽一般無(wú)活性(如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽),少數(shù)有活性(如抗利尿激素就是多肽類激素),與蛋白質(zhì)相比,多肽的分子量較小,沒有空間結(jié)構(gòu),一般無(wú)活性;蛋白質(zhì)的分子量較大,有空間結(jié)構(gòu),有活性(變性后活性下降或消失,活性消失叫做失活)
因此,一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì)。
多肽合成:
是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過(guò)程,固相合成順序一般從C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。過(guò)去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來(lái),經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn)和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn),從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。多肽合成總的來(lái)說(shuō)分成兩種:固相合成和液相多肽合成。
抗體結(jié)構(gòu):
抗體是具有4條多肽鏈的對(duì)稱結(jié)構(gòu),其中2條較長(zhǎng)、相對(duì)分子量較大的相同的重鏈(H鏈);2條較短、相對(duì)分子量較小的相同的輕鏈(L鏈)。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子。輕鏈有κ和λ兩種,重鏈有μ、δ、γ、ε和α五種。 整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。在給定的物種中,不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列。可變區(qū)位于""Y""的兩臂末端。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈,這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū)。高變區(qū)位于分子表面,zui多由17個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成,少則只有2 ~ 3個(gè)。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原抗原的特異性。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的,位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段(antigen-binding fragment, Fab)。""Y""的柄部稱結(jié)晶片段(crystalline fragment,FC),糖結(jié)合在FC 上。
抗體規(guī)律:
(1)初次反應(yīng)產(chǎn)生抗體:當(dāng)抗原*次進(jìn)入機(jī)體時(shí),需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體,且抗體產(chǎn)生的量也不多,在體內(nèi)維持的時(shí)間也較短。
(2)再次反應(yīng)產(chǎn)生抗體:當(dāng)相同抗原第二次進(jìn)入機(jī)體后,開始時(shí),由于原有抗體中的一部分與再次進(jìn)入的抗原結(jié)合,可使原有抗體量略為降低。隨后,抗體效價(jià)迅速大量增加,可比初次反應(yīng)產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍,在體內(nèi)留存的時(shí)間亦較長(zhǎng)。
(3)回憶反應(yīng)產(chǎn)生抗體:由抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后可逐漸消失。此時(shí)若再次接觸抗原,可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機(jī)體的抗原與初次相同,則稱為特異性回憶反應(yīng);若與初次反應(yīng)不同,則稱為非特異性回憶反應(yīng)。非特異性回憶反應(yīng)引起的抗體的上升是暫時(shí)性的,短時(shí)間內(nèi)即很快下降。
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