Anti-NSF抗體,N-乙基順丁烯二酰亞胺敏感融合蛋白抗體*，瑞齊生物抗體應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA等實驗中，*，提供完善的售前、售中、售后服務(wù)，咨詢或在線客服，我們將竭誠為您服務(wù)。在RICKY，我們堅持對產(chǎn)品質(zhì)量作不斷的評估、創(chuàng)新和改善以確保您對我們產(chǎn)品的高度信任！
【產(chǎn)品名稱】：Anti-NSF抗體,N-乙基順丁烯二酰亞胺敏感融合蛋白抗體
【規(guī) 格】：0.1ml/0.2ml
【濃 度】：1mg/1ml
【抗體來源】：Mouse,Rabbit or Goat
【克隆類型】：polyclonal or monoclonal
【產(chǎn)品類型】：一抗
【性 狀】：Lyophilized or Liquid
【亞 型】：IgG
【純化方法】：affinity purified by Protein A
【儲 存 液】：0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
【產(chǎn)品應(yīng)用】：not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
【保存條件】：Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
應(yīng)用于WB實驗時的操作方法：蛋白提樣品制備
1、 將培養(yǎng)液吸入至15 ml離心管中，于2500 rpm離心5 min。
2、 棄上清，加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌，然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次。
3、 用槍吸干上清后，加100 μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30 min，裂解過程中要經(jīng)常彈一彈以使細胞充分裂解。
4、將裂解液4℃、12000 rpm離心5 min，取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法測蛋白濃度
SDS－PAGE電泳
1、 玻璃板對齊后放入夾中卡緊，然后垂直卡在架子上準備灌膠。
2、按前面方法配10％分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時，可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出，待膠面升到綠帶中間線高度時即可。然后膠上加一層水，液封后的膠凝的更快。（灌膠時開始可快一些，膠面快到所需高度時要放慢速度。操作時膠一定要沿玻璃板流下，這樣膠中才不會有氣泡。加水液封時要慢，否則膠會被沖變型。）
3、 當(dāng)水和膠之間有一條折射線時，說明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4、 按方法配4％的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生。插梳子時要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后，兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5、 用水沖洗濃縮膠，將其放入電泳槽中。
6、 測完蛋白含量后，計算含20-50 μg蛋白（根據(jù)自己的實驗需要進行選擇，沒有固定的量）的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至200 μl的EP管中，加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開始準備上樣。（電泳液至少要漫過內(nèi)測的小玻璃板。）用微量進樣器貼壁吸取樣品，將樣品吸出不要吸進氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品（包括一孔做可視的蛋白marker）。（加樣太快可使樣品沖出加樣孔，若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個樣品時，進樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數(shù)次，以免交叉污染）
8、電泳：濃縮膠時用80-100 V跑，到分離膠以后用150-200 V跑，總時間2 h左右，電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳，進行轉(zhuǎn)膜。
轉(zhuǎn)膜
1、 轉(zhuǎn)一張膜需準備6張7.0～8.3 cm的濾紙和1張7.3～8.6 cm的NC膜。切濾紙和膜時一定要戴手套，因為手上的蛋白會污染膜。將切好的硝酸纖維素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有轉(zhuǎn)移液的搪瓷盤里放入轉(zhuǎn)膜用的夾子、兩塊海綿墊、一支玻棒、濾紙和浸過的膜。 將夾子打開使黑的一面保持水平。在上面墊一張海綿墊，用玻棒趕走氣泡。在墊子上墊三層濾紙。
3、將玻璃板輕輕撬開后剝膠，除去小玻璃板后，將濃縮膠輕輕刮去。小心剝下分離膠蓋于濾紙上，用手調(diào)整使其與濾紙對齊，輕輕用玻棒搟去氣泡。將膜蓋于膠上，要蓋滿整個膠（膜蓋下后不可再移動）并除氣泡。在膜上蓋3張濾紙并除去氣泡。zui后蓋另一個海綿墊，合起夾子。整個操作在轉(zhuǎn)移液中進行，要不斷的搟去氣泡。膜兩邊的濾紙不能相互接觸，接觸后會發(fā)生短路。
4、將夾子放入轉(zhuǎn)移槽槽中，使夾的黑面對槽的黑面，夾的白面對槽的紅面。電轉(zhuǎn)移時會產(chǎn)熱，在槽的一邊放一塊冰來降溫。一般用60 V轉(zhuǎn)移2 h或40 V轉(zhuǎn)移3 h。
免疫反應(yīng)
1、將膜用TBS從下向上浸濕后，移至含有封閉液的平皿中，室溫下脫色搖床上搖動封閉1 h。
2、將一抗用TBST稀釋至適當(dāng)濃度（在1.5 ml離心管中）；將膜涂滿一抗溶液后置于濕盒中，4℃孵育過夜，用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次，每次10 min；再用TBS洗一次，10 min。
3、同上方法準備二抗稀釋液并與膜接觸，室溫下孵育1～2 h后，用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次，每次10 min；再用TBS洗一次，10 min，進行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
化學(xué)發(fā)光，顯影，定影
將A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合；1 min后，將膜蛋白面朝下與此混合液充分接觸；1 min后，將膜移至另一保鮮膜上，去盡殘液，包好，放入X-光片夾中，曝光相應(yīng)時間。沖洗膠片。
相關(guān)產(chǎn)品：
Anti-CDK8/Cy3??熒光素（Cy3）標記的周期素依賴性激酶8抗體
Anti-MAD2/Cy5??Cy5標記的有絲分裂阻滯缺陷蛋白2抗體
Anti-CDK8/RBITC??羅丹明（RBITC）標記的周期素依賴性激酶8抗體
Anti-MAD2/PE??PE標記的有絲分裂阻滯缺陷蛋白2抗體
Anti-CDK8/Cy5??Cy5標記的周期素依賴性激酶8抗體
Anti-CDK8/PE??PE標記的周期素依賴性激酶8抗體
Anti-CDK8/FITC??熒光素（FITC）標記的周期素依賴性激酶8抗體
Anti-MAD2/FITC??FITC標記的有絲分裂阻滯缺陷蛋白2抗體
Anti-CDK8/HRP??辣根過氧化物酶標記的周期素依賴性激酶8抗體
Anti-MAD2/HRP??辣根過氧化物酶標記的有絲分裂阻滯缺陷蛋白2抗體
Anti-CDK8/Biotin ??*標記的周期素依賴性激酶8抗體
Anti-MAD2/RBITC??羅丹明（RBITC）標記的有絲分裂阻滯缺陷蛋白2抗體
Anti-MAD2/Biotin??*標記的有絲分裂阻滯缺陷蛋白2抗體
Anti-CDK9/Cyclin T1/Cy3??Cy3標記的周期素依賴性激酶9抗體
Anti-CDK9/Cyclin T1/Cy5??Cy5標記的周期素依賴性激酶9抗體
Anti-CDK9/Cyclin T1/PE??PE標記的周期素依賴性激酶9抗體
Anti-CDK9/Cyclin T1/HRP??辣根過氧化物酶標記的周期素依賴性激酶9抗體
Anti-CDK9/Cyclin T1/FITC??FITC標記的周期素依賴性激酶9抗體
Anti-CDK9/Cyclin T1/RBITC??羅丹明（RBITC）標記的周期素依賴性激酶9抗體
Anti-CDK9/Cyclin T1/Biotin??*標記的周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr186)/Cy5??Cy5標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr186)/Cy3??熒光素（Cy3）標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr186)/PE??PE標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr186)/HRP??辣根過氧化物酶標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr186)/FITC??熒光素（FITC）標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr186)/Biotin ??*標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr186)/RBITC??羅丹明（RBITC）標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr29)/Cy3??熒光素（Cy3）標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr29)/Cy5??Cy5標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr29)/PE??PE標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr29)/FITC??熒光素（FITC）標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr29)/HRP??辣根過氧化物酶標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr29)/Biotin ??*標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-Phospho-CDK9 (Thr29)/RBITC??羅丹明（RBITC）標記的磷酸化周期素依賴性激酶9抗體
Anti-CDK10/Cy3??熒光素（Cy3）標記的周期素依賴性激酶10
Anti-CDK10/Cy5??Cy5標記的周期素依賴性激酶10
Anti-CDK10/PE??PE標記的周期素依賴性激酶10
Anti-CDK10/HRP??辣根過氧化物酶標記的周期素依賴性激酶10
Anti-CDK10/FITC??熒光素（FITC）標記的周期素依賴性激酶10
Anti-CDK10/RBITC??羅丹明（RBITC）標記的周期素依賴性激酶10
Anti-CDK10/Biotin ??*標記的周期素依賴性激酶10
Anti-CDK11/Cy3??熒光素（Cy3）標記的周期素依賴性激酶11抗體
Anti-CDK11/Cy5??Cy5標記的周期素依賴性激酶11抗體
Anti-CDK11/PE??PE標記的周期素依賴性激酶11抗體
Anti-CDK11/FITC??熒光素（FITC）標記的周期素依賴性激酶11抗體
Anti-CDK11/HRP??辣根過氧化物酶標記的周期素依賴性激酶11抗體
Anti-CDK11/RBITC??羅丹明（RBITC）標記的周期素依賴性激酶11抗體
Anti-CDK11/Biotin ??*標記的周期素依賴性激酶11抗體
本公司*供應(yīng)免疫組化抗體、WB抗體、免疫組化試劑盒和抗體試驗所需全部相關(guān)試劑、熒光標記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實驗抗體，訂購優(yōu)質(zhì)：。
