Anti-NSF抗體,N-乙基順丁烯二酰亞胺敏感融合蛋白抗體*，瑞齊生物抗體應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA等實(shí)驗(yàn)中，*，提供完善的售前、售中、售后服務(wù)，咨詢或在線客服，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)。在RICKY，我們堅(jiān)持對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量作不斷的評(píng)估、創(chuàng)新和改善以確保您對(duì)我們產(chǎn)品的高度信任！
【產(chǎn)品名稱】：Anti-NSF抗體,N-乙基順丁烯二酰亞胺敏感融合蛋白抗體

【規(guī)        格】：0.1ml/0.2ml
【濃        度】：1mg/1ml
【抗體來(lái)源】：Mouse,Rabbit or Goat
【克隆類型】：polyclonal or monoclonal
【產(chǎn)品類型】：一抗
【性        狀】：Lyophilized or Liquid
【亞        型】：IgG
【純化方法】：affinity purified by Protein A
【儲(chǔ) 存 液】：0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
【產(chǎn)品應(yīng)用】：not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
【保存條件】：Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
應(yīng)用于WB實(shí)驗(yàn)時(shí)的操作方法：蛋白提樣品制備
1、 將培養(yǎng)液吸入至15 ml離心管中，于2500 rpm離心5 min。
2、 棄上清，加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌，然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次。
3、 用槍吸干上清后，加100 μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30 min，裂解過(guò)程中要經(jīng)常彈一彈以使細(xì)胞充分裂解。
4、將裂解液4℃、12000 rpm離心5 min，取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法測(cè)蛋白濃度
SDS－PAGE電泳
1、 玻璃板對(duì)齊后放入夾中卡緊，然后垂直卡在架子上準(zhǔn)備灌膠。
2、按前面方法配10％分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時(shí)，可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出，待膠面升到綠帶中間線高度時(shí)即可。然后膠上加一層水，液封后的膠凝的更快。（灌膠時(shí)開(kāi)始可快一些，膠面快到所需高度時(shí)要放慢速度。操作時(shí)膠一定要沿玻璃板流下，這樣膠中才不會(huì)有氣泡。加水液封時(shí)要慢，否則膠會(huì)被沖變型。）
3、 當(dāng)水和膠之間有一條折射線時(shí)，說(shuō)明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4、 按方法配4％的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時(shí)也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生。插梳子時(shí)要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后，兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5、 用水沖洗濃縮膠，將其放入電泳槽中。
6、 測(cè)完蛋白含量后，計(jì)算含20-50 μg蛋白（根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，沒(méi)有固定的量）的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至200 μl的EP管中，加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開(kāi)始準(zhǔn)備上樣。（電泳液至少要漫過(guò)內(nèi)測(cè)的小玻璃板。）用微量進(jìn)樣器貼壁吸取樣品，將樣品吸出不要吸進(jìn)氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品（包括一孔做可視的蛋白marker）。（加樣太快可使樣品沖出加樣孔，若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個(gè)樣品時(shí)，進(jìn)樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數(shù)次，以免交叉污染）
8、電泳：濃縮膠時(shí)用80-100 V跑，到分離膠以后用150-200 V跑，總時(shí)間2 h左右，電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳，進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。
轉(zhuǎn)膜
1、 轉(zhuǎn)一張膜需準(zhǔn)備6張7.0～8.3 cm的濾紙和1張7.3～8.6 cm的NC膜。切濾紙和膜時(shí)一定要戴手套，因?yàn)槭稚系牡鞍讜?huì)污染膜。將切好的硝酸纖維素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有轉(zhuǎn)移液的搪瓷盤(pán)里放入轉(zhuǎn)膜用的夾子、兩塊海綿墊、一支玻棒、濾紙和浸過(guò)的膜。 將夾子打開(kāi)使黑的一面保持水平。在上面墊一張海綿墊，用玻棒趕走氣泡。在墊子上墊三層濾紙。
3、將玻璃板輕輕撬開(kāi)后剝膠，除去小玻璃板后，將濃縮膠輕輕刮去。小心剝下分離膠蓋于濾紙上，用手調(diào)整使其與濾紙對(duì)齊，輕輕用玻棒搟去氣泡。將膜蓋于膠上，要蓋滿整個(gè)膠（膜蓋下后不可再移動(dòng)）并除氣泡。在膜上蓋3張濾紙并除去氣泡。zui后蓋另一個(gè)海綿墊，合起夾子。整個(gè)操作在轉(zhuǎn)移液中進(jìn)行，要不斷的搟去氣泡。膜兩邊的濾紙不能相互接觸，接觸后會(huì)發(fā)生短路。
4、將夾子放入轉(zhuǎn)移槽槽中，使夾的黑面對(duì)槽的黑面，夾的白面對(duì)槽的紅面。電轉(zhuǎn)移時(shí)會(huì)產(chǎn)熱，在槽的一邊放一塊冰來(lái)降溫。一般用60 V轉(zhuǎn)移2 h或40 V轉(zhuǎn)移3 h。
免疫反應(yīng)
1、將膜用TBS從下向上浸濕后，移至含有封閉液的平皿中，室溫下脫色搖床上搖動(dòng)封閉1 h。
2、將一抗用TBST稀釋至適當(dāng)濃度（在1.5 ml離心管中）；將膜涂滿一抗溶液后置于濕盒中，4℃孵育過(guò)夜，用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次，每次10 min；再用TBS洗一次，10 min。
3、同上方法準(zhǔn)備二抗稀釋液并與膜接觸，室溫下孵育1～2 h后，用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次，每次10 min；再用TBS洗一次，10 min，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
化學(xué)發(fā)光，顯影，定影
將A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合；1 min后，將膜蛋白面朝下與此混合液充分接觸；1 min后，將膜移至另一保鮮膜上，去盡殘液，包好，放入X-光片夾中，曝光相應(yīng)時(shí)間。沖洗膠片。
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