人磷酸化細胞外信號調節激酶(pERK)ELISA試劑盒實驗過程中酶標比色儀的使用

    酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指于測讀ELISA結果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設計。許多試劑公司配套供應酶標儀。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數的準確性、重復性、精確度和可測范圍、線性等等。優良的酶標儀的讀數一般可精確到0.001，準確性為±1%，重復性達0.5%。舉例說，若某孔測得的A值為1.083，則該孔相對于空氣的真實A值應為1.083±0.01(1.073～1.093)，重復測定數次，其A值均應1.083±0.05(1.078～1.088)在之間。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同。普通的酶標儀在0.000～2.000，新型號的酶標儀上限拓寬達2.900，甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍，比如某一酶標儀的可測范圍為0.000～2.900，而其線性范圍僅0.000～2.000，這在定量ELISA中制作標準曲線時應予注意。

    酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15～30℃，使用前先預熱儀器15-30分鐘，測讀結果更穩定。

測讀A值時，要選用產物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次，*次在zui適波長(W1)，第二次在不敏感波長(W2)，兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1，630nm為W2，zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

人磷酸化細胞外信號調節激酶(pERK)ELISA試劑盒選擇

◎試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價。

◎靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力；2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。

◎特異性：常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應，使測定結果升高，可能導致假陽性，所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。

◎精密度：ELISA試劑一般指其批內CV%，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍。

◎準確度：通過添加回收實驗進行評價。

◎簡便性：指在不影響試劑的前三項指標的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結果判斷簡單明了，定量試驗結果計算也應簡單。

◎安全性：指試劑對操作者和環境安全無害無傳染性。

◎經濟性：試劑在同等質量條件下通過大規模生產或技術進步降低成本，而市場價格比較合理。

◎試劑評價：需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。

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