基礎葡萄球菌增菌肉湯基礎
絕大多數培養基是建立在*(BSS)基礎上,添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養物質。zui廣泛應用的培養基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸,維生素的范圍亦很廣,另外常規含有無機鹽和代謝添加劑(例如核苷酸)。MEM/F12 這兩種培養基各取1/2,形成神經生物學zui通用的培養基。Dulbecco`s改良培養基——DMEM,現應用于快速生長的細胞,同MEM含有相同的營養成分,但濃度高出2~4倍。選擇某種培養基,應仔細了解成分表,應知道大多數情形下培養基都有不足。例如,有些培養基在氨基酸中包括有*,而這種培養基雖廣泛用于神經生物學領域,但它對某些對*敏感的可能有細胞外毒性損傷的神經元而言,則并非*選擇,特別是如果神經元生長在缺乏膠質的環境中時。F12中含有*,據報道也有神經毒效應。
葡萄球菌增菌肉湯基礎 制備方法:
1. 培養同源細胞(未克隆前時的同一細胞)至半匯合狀態時,更換一次培養液,再繼續培養24~48小時后,吸出所有培養液。
2. 離心:3000~4000/分離心10分鐘,吸取上清液。
3. 濾過:再經直徑0.22μm濾孔的濾膜過濾,低溫凍存貯備用;用時取1分適應培養基+2培養基混合使用。
生長因子絕大多數哺乳類胚胎神經元有嚴格的營養要求,若不能提供適宜的生長因子或合適的因子組分,將會使絕大多數神經元在體外培養的數天中死亡。解決這一問題有兩條思路,一是讓培養細胞提供自己的營養因子,二是在 中加入純的生長因子。如果細胞混合物能在高密度時生長,所需的生長因子便會積累到可觀的數值,尤其當培養基很少變化時。若某種細胞混合物生長時有很少的營養需求,可保持培養基在一段時間里不作任何變動,以使營養(生長)因子積累,而zui后促使所需要的細胞類型能夠生長。但是,這種對營養(生長)因子自身倚賴性亦有弊端,因為通常在混合細胞群體中細胞很難有同比例增殖,某些細胞會因生長條件的貧乏而受限制。另外,這種方法只能進行相當高密度的細胞培養。因為培養基的條件在細胞的較低密度時變的不夠有效。不過某些時候純化神經元群體的低密度培養可用條件培養基(經過了高密度培養)進行,或在膠質上生長的神經元所用過的培養基來支持。
滿足神經元營養需求的第二條途徑是向培養基中加入生長因子。通常用于組培的通用適宜因子是神經生長因子NGF。不過,只有少數對這種蛋白質有反應的細胞類型的細胞才能生長。
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