牛心湯瓊脂特殊培養法

二倍體細胞培養法與一般培養相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為：

1.吸除舊培養液注入另瓶中。

2.用溫BSS沖洗1次。

3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。

4.待細胞附著松動、細胞質邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養液（新舊培養液按2：1新舊混合）。

5.輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。

6.按一分為二比例接種培養。

使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法：

1.取原代培養的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按105細胞/毫升重新接種培養。

2.在細胞半匯合時，準備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細胞的量加入到培養瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。

3.細胞經上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養液、再培養24小時，*消化細胞制成懸液，按5×104（104細胞/cm2）接種入新牛心湯瓊脂中。

4.48小時后，即可用于細胞克隆之用。

細胞分離（克隆）培養

多孔塑料培養板單細胞克隆法：

1.消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內培養液，加消化液。

2.低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞，使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養液。

3.接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養板每孔內加0.5毫升。接種時要迅速準確，爭取在zui短時間內加完，以免培養液蒸發，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養。

4.標記：培養6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標記下含有單個細胞的孔，置CO2溫箱培養。在培養中一般無需換液，只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養基，但不要吸除過多，余少許，以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養液，繼續培養3~4周。待孔內細胞增至500~600個時，可進行分離培養。

5.分離擴大培養：培養86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔，先吸除舊培養液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細胞群即可，如過多，應吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發現細胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養基，用吸管輕輕吹打，當細胞離開底物懸浮后，一并吸入管內，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養液，置CO2溫箱中繼續培養、增殖，使之形成新的細胞群后，即轉用常規培養法培養。

相關產品如下：hz1096    WS瓊脂    250g    用于沙門氏菌的選擇性分離（GB標準）
    WS Salmonella Agar        
hz1097    氯化鎂孔雀綠增菌液    250g    用于沙門氏菌選擇性增菌培養(ISO標準)
    Rappaport Vassiliadis  Medium        
hz1098    酚紅煌綠瓊脂    250g    用于沙門氏菌分離培養（GB標準）
    Phenolphthalein Brilliant Green Agar        
hz1099    葡萄糖銨培養基    250g    用于志賀氏菌的葡萄糖銨試驗（GB標準）
    Ammonium Dextrose Medium        
hz1100    葡萄糖半固體培養基    250g    用于志賀氏菌的復合生化試驗（GB標準）
    Dextrose Semisolid Medium        
hz1101    動力-吲哚-尿素培養基基礎（MIU）    250g    用于細菌的復合生化試驗
    Motility Indol Urea Medium Base        
hz1102    中國藍瓊脂培養基    250g    用于腸道菌選擇性分離培養
    China Blue Medium        
hz1103    醋酸鉛培養基    250g    用于硫化氫試驗
    Lead Acetate Medium        
hz1104    MKTTN肉湯基礎    250g    用于沙門氏菌選擇性增菌培養(ISO標準)，已加入新生霉素，無需另行加入
    Muller-KauMFFAn Tetrathionate Novobiocin Broth Base        
hz1105    乳糖肉湯（LB）    250g    用于食品中沙門氏菌檢驗前增菌
    Lactose Broth        
hz1106    賴氨酸鐵瓊脂    250g    用于賴氨酸、硫化氫試驗
    Lysine Iron Agar        
hz1107    EF-18瓊脂    250g    用于濾膜法篩選食品中沙門氏菌，使用前加入無菌過濾的新生霉素，zui終濃度0.015g/L（SN/T 1059.1）
    EF-18 Agar        
hz1108    RVS肉湯    250g    用于沙門氏菌選擇性增菌培養(ISO標準)
    Rappaport-Vassiliadis Soya Broth        
*檢測培養基            
貨號    產品名稱    規格    產品說明與用途
hz1015    胰蛋白胨大豆肉湯    250g    用于*的MPN測定，增菌培養，NaCl濃度可根據需要而調整（GB，SN標準）
    Trypticase (Tryptic) Soy Broth        
hz1072    Baird-Parker瓊脂基礎    250g    用于*的選擇性分離培養（GB，SN，FDA標準）
    Baird-Parker Agar Base