普通啤酒瓊脂(UBA 培養(yǎng)基)特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同,關(guān)鍵在于傳代,其傳代程序為:
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化,加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可;作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大,便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液(新舊培養(yǎng)液按2:1新舊混合)。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法:
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞,90%匯合時制成細(xì)胞懸液,再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時,準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C,按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜;或用射線單次照射,劑量30~50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后,Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時,*消化細(xì)胞制成懸液,按5×104(104細(xì)胞/cm2)接種入新普通啤酒瓊脂(UBA 培養(yǎng)基)中。
4.48小時后,即可用于細(xì)胞克隆之用。
普通啤酒瓊脂(UBA 培養(yǎng)基)細(xì)胞分離(克隆)培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆細(xì)胞,吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液,加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備:做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液,然后稀釋細(xì)胞,使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液,zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種:先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液,使混懸均勻,繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確,爭取在zui短時間內(nèi)加完,以免培養(yǎng)液蒸發(fā),然后迅速蓋好蓋板,置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記:培養(yǎng)6~12小時后,待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后,從溫箱中取出,置倒置光顯微鏡臺上,觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔,置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液,只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基,但不要吸除過多,余少許,以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時,可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng):培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔,先吸除舊培養(yǎng)液,用Hanks洗1~2次,繼加*少許,加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可,如過多,應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視,待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時,加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打,當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后,一并吸入管內(nèi),移入另瓶或皿中,再補加一定量克隆培養(yǎng)液,置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖,使之形成新的細(xì)胞群后,即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
普通啤酒瓊脂(UBA 培養(yǎng)基)相關(guān)產(chǎn)品如下:hz1396 酪胨瓊脂 250g 用于藥品,生物制品無菌試驗
Peptone from Casein Agar
hz1397 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基 250g 用于藥品,生物制品無菌試驗
Dextrose Peptone Medium
hz1398 卵黃高鹽瓊脂基礎(chǔ) 250g 用于藥品、生物制品*選擇性分離
Egg-Yolk Salt Agar Base
hz1399 MUG培養(yǎng)基 100g 用于大腸桿菌測定
MUG Medium
hz1400 真菌瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于無菌生長試驗
Fungi Agar Medium
hz1402 磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基 Phosphate Glucose Peptone Water Medium 250g 用于甲基紅試驗
hz1403 胰蛋白胨水培養(yǎng)基 250g 用于靛基質(zhì)試驗
Peptone Water Medium
hz1405 硝酸鹽胨水培養(yǎng)基 250g 用于硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗
Nitrate Saline Peptone Water Medium
hz1406 改良馬丁液體培養(yǎng)基 250g 用于菌苗制造及生物制品霉菌無菌檢驗
Martin Broth ,Modified
hz1408 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于生物制品霉菌無菌檢驗
Martin Agar Medium ,Modified
飲用水及水源檢測培養(yǎng)基
hz1001 平板計數(shù)瓊脂 250g 用于飲用天然礦泉水中細(xì)菌總數(shù)的檢驗
Plate CountAgar
hz1036 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 250g 用于飲用天然礦泉水中大腸桿菌的檢驗(GB標(biāo)準(zhǔn))
Lactose Bile Broth
hz1039 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 250g 用于飲用水,水源水中總大腸菌群的測定
Lactose Peptone Broth
hz1042 亮綠瓊脂 250g 用于飲用水,水源水中沙門氏菌選擇性增菌
Brilliant Green Lactose Broth
hz1043 亮綠乳糖培養(yǎng)基 Brilliant Green Lactose Medium 250g 用于飲用天然礦泉水中大腸桿菌的檢驗(GB標(biāo)準(zhǔn))
hz1083 亞硫酸鉍瓊脂 250g 用于飲用水,水源水中沙門氏菌的選擇性培養(yǎng)
Bismuth Sulfite Agar
hz1044 品紅亞硫酸鈉瓊脂(遠(yuǎn)滕氏瓊脂) 250g 用于飲用水、水源水中總大腸菌群的選擇性分離和確證
Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar
hz1410 假單胞分離瓊脂 250g 用于飲用水,水源水中假單胞菌群的測定
Pseudomonas Isolation Agar