鹽酸*特殊培養(yǎng)法

二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?/span>

1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。

2.用溫BSS沖洗1次。

3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。

4.待細(xì)胞附著松動(dòng)、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。

5.輕輕反復(fù)吹打制成單個(gè)細(xì)胞懸液。

6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。

使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：

1.取原代培養(yǎng)的人或動(dòng)物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時(shí)制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。

2.在細(xì)胞半?yún)R合時(shí)，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。

3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時(shí)，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新鹽酸*中。

4.48小時(shí)后，即可用于細(xì)胞克隆之用。

細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)

多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：

1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，加消化液。

2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時(shí)首先需先用消化法制備出分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。

3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時(shí)要迅速準(zhǔn)確，爭(zhēng)取在zui短時(shí)間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。

4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時(shí)后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺(tái)上，觀察和標(biāo)記下含有單個(gè)細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長(zhǎng)過于緩慢時(shí)才可進(jìn)行換液。換液時(shí)先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個(gè)時(shí)，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。

5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時(shí)后進(jìn)行觀察。挑選生長(zhǎng)良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時(shí)，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。

相關(guān)產(chǎn)品如下：hz0147    小鼠乳腺癌細(xì)胞株 EMT-6細(xì)胞
hz0148    小鼠乳腺癌細(xì)胞,MA891細(xì)胞
hz0149    小鼠乳腺癌細(xì)胞,CCC-Ca761-03細(xì)胞
hz0150    小鼠乳腺癌細(xì)胞,4T1細(xì)胞
hz0151    小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞,MA-891細(xì)胞
hz0152    小鼠乳腺 EMT6細(xì)胞
hz0153    小鼠乳癌細(xì)胞 4T1細(xì)胞
hz0154    小鼠肉瘤 S37細(xì)胞
hz0155    小鼠前列腺癌細(xì)胞,RM-1細(xì)胞,
hz0156    小鼠前成骨細(xì)胞,MC-3T3細(xì)胞
hz0157    小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞,L Wnt-3A細(xì)胞,
hz0158    小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞,A9細(xì)胞
hz0159    小鼠皮膚細(xì)胞,JB6-C41細(xì)胞
hz0160    小鼠皮膚細(xì)胞,JB6-C30細(xì)胞
hz0161    小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞,B16-F10細(xì)胞,
hz0162    小鼠胚胎纖維細(xì)胞,STO細(xì)胞
hz0163    小鼠胚胎細(xì)胞,NIH/3T3細(xì)胞,
hz0164    小鼠胚胎肝細(xì)胞,BNL CL.2細(xì)胞,
hz0165    小鼠胚胎干細(xì)胞瘤細(xì)胞,P19細(xì)胞
hz0166    小鼠胚胎干細(xì)胞,CmESCs-11細(xì)胞
hz0167    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(前脂肪) NIH-3T3-L1細(xì)胞,
hz0168    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,T6-Swiss albino細(xì)胞
hz0169    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,SK-MEL-1細(xì)胞
hz0170    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,Psi2 DAP細(xì)胞
hz0171    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,PA12細(xì)胞
hz0172    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,NIH3T3細(xì)胞
hz0173    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,MEF細(xì)胞
hz0174    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,MC3T3-L1細(xì)胞
hz0175    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,C3H/10T1/2細(xì)胞
hz0176    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,BALB/3T3clone A31細(xì)胞
hz0177    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,3T6-Swiss albino細(xì)胞
hz0178    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,3T3-L1細(xì)胞,
hz0179    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,3T3 clone A31細(xì)胞
hz0180    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,10T1細(xì)胞
hz0181    小鼠胚成纖維包裝細(xì)胞,ψ2細(xì)胞