單組分TMB顯色液
3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine Liquid Substrate
Cas 號:
分子式:分子量:
別 名:單組分TMB過氧化物酶底物液
性 狀:3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine (TMB)是一種過氧化物酶底物,用于ELISA 反應。底物產生一種可溶性淡藍色的末端產物,可在370 或 655 nm在分光光度計上讀取。TMB反應可以用2 M H2SO4 (產生黃色)終止,450 nm讀取。
TMB又分可溶型和沉淀型。 可溶型:與HRP反應形成可溶性藍褐色產物,適用于ELISA及其他通過液體反應檢測HRP的應用,與HRP反應形成沉淀性藍褐色產物,一步即用型溶液,無需混合,方便快捷 。 沉淀型:適用于Western Blot及其免疫沉淀化學等,一步即用型溶液,無需混合,方便快捷 單組分TMB過氧化物酶底物正常情況下淡黃色、淡藍色或者是淡綠色。底物溶液在650nm時檢測OD值小于0.04
質量標準:使用方法
使用之前,以超純水反復洗滌的適當容器,倒出適量單組分TMB底物溶液,待溶液達到室溫即可使用。
加液:加完HRP結合物并溫育一定時間后,洗板3-5次,每孔加TMB底物100-150uL, 37°C溫育15-30分鐘。
終止(備選):加等體積的1N的HCl或者2N的H2SO4來終止反應。酶標孔中反應液從藍色變為黃色。
讀數:終止反應后,30分鐘內在450nm處讀數。不加終止液,顯色更加穩定,可以在620-650nm處讀數。
注意:
降低底物強度:如果出現高的反應背景和/或沉淀,表明TMB底物反應過于強烈。為了避免產生沉淀,可以在加入終止液后馬上讀數;另外,可以進一步稀釋一抗和 /或HRP結合物。為了降低非特異性背景顏色,*進一步降低一抗和/或HRP結合物的濃度,盡量避免降低底物濃度。動力學檢測:TMB單組分底物在與過氧化物酶反應時產生一種藍色,可以在加底物后620-650nm處讀數,不需終止反應。
穩定性:2-8°C條件下,大于18個月。
敏感性:相當于顯色AB雙液,或高于。
組成:TMB,穩定劑。
貯 存:保存:2-8°C,請勿冷凍。
用途 TMB因其靈敏度較高及無致癌性而得到廣泛應用。單組分TMB過氧化物酶底物與辣根過氧化物酶連接物反應時產生一種深藍色的產物,適用于定量以及定性分析的酶聯免疫分析當中。
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