Anti-Adenosine deaminase抗體，腺苷脫氨酶抗體

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【規格】： 100ug

【中英文名稱】：

Anti-Adenosine deaminase抗體，腺苷脫氨酶抗體

【產品濃度】：1mg/ml

【抗體來源】：兔來源和鼠來源

【克隆類型】：兔來源為polyclonal，鼠來源為monoclonal

【產品應用】： 應用領域（僅適用于科研實驗）:  Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等，具體適用的實驗請，本公司有同一產品適用于不同實驗的抗體。

【相關標記抗體】：

HRP標記抗體,Biotin標記抗體,Gold標記抗體,RBITC標記抗體,AP標記抗體,FITC標記抗體,Cy3標記抗體,Cy5標記抗體,Cy5.5標記抗體,Cy7標記抗體,PE標記抗體,PE-Cy3標記抗體,PE-Cy5標記抗體,PE-Cy5.5標記抗體,PE-Cy7標記抗體,APC標記抗體,Alexa Fluor 350標記抗體,Alexa Fluor 488標記抗體,Alexa Fluor 555標記抗體,
Alexa Fluor 647標記抗體

【保質期】： 1年

【保存條件】：Store at -20 °C for one year. The lyophilized powder is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. Upon reconstituted, aliquot and store at -20°C or -80°C. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

單抗專一性高，但是經過SDS-PAGE變性膠電泳的蛋白質可能由于原來的識別位點構象發生改變而不被識別，多抗不如單抗專一性高但更容易得到結果。如果還有多種抗體選擇，那當然是來源于兔或者小鼠抗體為好，因為后繼的檢測試劑盒一般都是針對兔鼠的居多，因而選擇范圍更大通用性也更強。除了無標記的一抗，還有*等各種標記一抗。用熒光標記的一抗直接檢測而降低背景和非特異結合，不過由于少了二抗的級聯放大信號擴增，信號也會比較弱，所以需要選擇熒光信號特別明亮的標記，一抗的稀釋度通常需要預實驗摸條件，可以根據說明書上建議的WB稀釋度附近做2—3個梯度，如果是用化學發光法檢測，由于靈敏度高而建議將稀釋度再放大一些。

二級試劑的作用是信號擴增，選擇是根據一抗的標記形式而決定的，對于無標記的一抗，可以選擇對應一抗來源種屬的標記二抗，或者更便宜的標記蛋白A（來自金黃葡萄球菌Protein A可以高度親和來自人，兔，豚鼠的IgG，但對大鼠、山羊和雞的IgG親和力弱）。不過，二抗是更可靠的選擇——除了要選擇對應一抗的來源種屬，也要根據你準備采用的檢測方法選擇合適的標記。

酶促反應比同位素安全且快速，已經成為Western Blot的主流檢測方法。酶促反應可以搭配不同的底物從而實現不同的顯色方法：化學發光Chemiluminescent和底物顯色Colormetirc/Chromogen，前者靈敏度很高——隨著各大廠家努力開發研制靈敏度更高的發光底物，化學發光法的靈敏度已經達到pg級別，甚至還有 Femto級別的，靈敏度超過了同位素；而后者由于直接顯色而操作簡便且成本低。zui為大家熟悉當數辣根過氧化物酶HRP（Horseradish Peroxidase，屬于過氧化物酶POD類）和堿性磷酸酶AP（Alkaline Phosphatase），此外還有比較少見的葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase）、β半乳糖苷酶β-Galactosidase。HRP 辣根過氧化酶是zui常見的酶促發光或顯色的交聯酶，由于HRP比活高、特異性更強、分子量小（40kD）、穩定和作用底物范圍廣的優點而得到廣泛使用。HRP的底物種類有不少，主要可以分為化學發光底物和生色底物2大類。對于底物的選擇，主要考慮的是靈敏度、背景和使用的方便性和穩定性——比如底物可溶性高使用就比較方便；對于WB來說產物不可溶有助于信號在原位的積累和結果的穩定（產物可溶的底物更適合于Elisa）。

zui熟悉的底物應該是3'3'二氨基聯苯胺DAB，DAB可以和HRP作用形成褐色不溶性產物，靈敏度高，特異性好，缺點就是需要現配現用，顯色后光照數小時會褪色，不能*保存，需要拍照記錄，而且有毒。DAB的選擇有一點小小的技巧——3'3'二氨基聯苯胺4鹽酸鹽的純品分子量為360.1，通常是深棕色粉末，不太好溶于水，容易得到有色顆粒的溶液而導致膜上的背景，而且價格還被炒得貴；但是如果選擇2水合3'3'二氨基聯苯胺4鹽酸鹽（分子量396.14）就是白色粉末狀晶體，易溶，溶液無色均勻，量大價格還便宜。DAB還有溶劑形式的，便于使用。由于DAB顯色是褐色，不如4-CN反差大容易拍照，有的廠家還推出了DAB+4-CN混合底物，結合了DAB靈敏度高和4-CN背景低，易成像的優點，能獲得很好的黑色沉淀成像。用金屬離子增強信號的DBA顯色試劑靈敏度可以高達20pg。TMB的signal-to-noise信噪比高，成分安全，特別合適于靈敏度要求高的WB，但是也要避免由于靈敏度高而引起的高背景，因此可以相應的延長封閉的時間和注意洗滌的次數；ACE各方面性質與DAB相似，但靈敏度要比DAB差一點。

HRP的生色底物顯色有DAB，4-CN ，CN/DAB，AEC和TMB等（而得到可溶性產物的底物如OPD，ABTS等則適用于ELISA）中，與化學發光法中的酶促基團發光不同，底物顯色主要是利用底物在有HRP和過氧化氫的存在下失去電子而呈現出顏色變化積累這一過程檢測WB的結果。Western Blot檢測系統中常用交聯酶兩大家族中的另外一類就是AP——堿性磷酸酶。堿性磷酸酶很早就被用于檢測系統——包括固定化抗原（WB）檢測和核酸檢測。但是做過AP實驗的經常會遇到膜上顯色背景偏高的問題，所以就WesternBlot本身來說偏愛HRP的要比AP多——分子克隆III解釋說由于在我們常用的封閉劑：脫脂奶粉和牛血清白蛋白BSA中富含AP，這樣當然顯色背景會高。所以分子克隆III*的AP適用封閉劑是6%的酪蛋白+1%聚乙烯吡咯烷酮+10mmo lEDTA 65度加熱一小時確保AP失活后再用于封閉。一些研究的樣本自身也含有較高水平的堿性磷酸酶，雖然實驗上很容易實現抑制內源AP影響，但實際上容易被忽略。AP顯色底物生成的產物主要是藍紫色，成像性好容易拍照。

一般的WB檢測過程中，都會有封閉、一抗、二抗和底物顯色這四道工序要“加工”。