本產品僅供科研實驗，不得用于醫療或食用
| 人肺表面活性物質相關蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒 | |||||||
| 上海信帆生物是一家專業的elisa試劑盒供應商,銷售各種進口和國產品牌的elisa試劑盒。對于elisa試劑盒,我們提供完善的質量保證,專業的技術解答,耐心周到的售后服務,成為國內多家科研機構和高校的試劑盒供應商。 | |||||||
| 本試劑盒含量是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系 | |||||||
| 人肺表面活性物質相關蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒 | |||||||
| 試劑樣本收集和處理方法 | |||||||
| 在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃備用，有條件的，-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。 | |||||||
| 液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。 | |||||||
| 1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。 | |||||||
| 2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。 | |||||||
| 3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參? 照此實行。 | |||||||
| 4.細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。 | |||||||
| 5.培養細胞：檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 | |||||||
| 6.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 | |||||||
| 7.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融. | |||||||
| 8.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 | |||||||
| 人肺表面活性物質相關蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒 | |||||||
| 詳細操作步驟 | |||||||
| 1. 加樣：標準品設定5個濃度點10個孔，每個濃度設定平行孔，加入50微升不同濃度的標準品，空白孔設定1個孔加入50微升蒸餾水（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔，在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 | |||||||
| 2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 | |||||||
| 3. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。 | |||||||
| 4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 | |||||||
| 5. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 | |||||||
| 6. 溫育：操作同3。 | |||||||
| 7. 洗滌：操作同5。 | |||||||
| 8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. | |||||||
| 9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 | |||||||
| 10. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 | |||||||
| 試劑盒操作過程中有什么注意事項 | |||||||
| 1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。 | |||||||
| 2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 | |||||||
| 3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。 | |||||||
| 4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。 | |||||||
| 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 | |||||||
| 6． 底物請避光保存。 | |||||||
| 7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. | |||||||
| 8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 | |||||||
| 9． 本試劑不同批號組分不得混用。 | |||||||
| 11. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 | |||||||
| 計算方法 | |||||||
| 操作完成之后，詳細的計算方式是：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 | |||||||
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