填入法 DNA 末端標(biāo)記試劑盒 A5次實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹：
填入法 DNA 末端標(biāo)記試劑盒 A5次實(shí)驗(yàn)步驟使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液： 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水 補(bǔ)足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長(zhǎng) 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注：通過(guò)第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時(shí)，乙醇沉淀后用凝膠過(guò)濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí)，請(qǐng)?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液： 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水 補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個(gè)微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：
2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時(shí)候，需要使用本步驟，即通過(guò)體積排阻色譜或過(guò)濾試 劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購(gòu)）對(duì)于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個(gè)堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來(lái)純化長(zhǎng)度不小于 10 個(gè) 堿基的寡核苷酸。
酪蛋白葡萄糖肉湯250g用于霉菌、酵母菌等的增菌培養(yǎng)
SBG磺胺增菌液 250(g) incubation media SBG磺胺增菌液 250(g)
3.5% NaC1蔗糖發(fā)酵管 3.5% NaC1蔗糖發(fā)酵管 20支 BR
抗生素檢定培養(yǎng)基H)250用于磺芐*效價(jià)測(cè)定incubationmedia抗生素檢定培養(yǎng)基H)250用于磺芐*效價(jià)測(cè)定
1%馬尿酸鈉溶液 0.4ml/支*20支 用于空腸彎曲菌馬尿酸鈉水解試驗(yàn)
Sabouraud-dextroseBroth
改良MSRV培養(yǎng)基 250(g) incubation media 改良MSRV培養(yǎng)基 250(g)
*發(fā)酵管 *發(fā)酵管 20支 BR
抗生素檢定培養(yǎng)基2號(hào)(高PH)250用于*，*等效價(jià)測(cè)定incubationmedia抗生素檢定培養(yǎng)基2號(hào)(高PH)250用于*，*等效價(jià)測(cè)定
Bolton肉湯添加劑 1ml*5支 用于添加到HB0273-1中
大豆胨酵母浸粉瓊脂(PYE)250g用于真菌的選擇性分離培養(yǎng)
BPL瓊脂 250(g) incubation media BPL瓊脂 250(g)
1% NaC1*發(fā)酵管 1% NaC1*發(fā)酵管 20支 BR
玫瑰紅鈉瓊脂250用于霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)incubationmedia玫瑰紅鈉瓊脂250用于霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)
BoltomBrothAdditrive
PhytoneYeastExtractAgar
BPLS瓊脂 250(g) incubation media BPLS瓊脂 250(g)
3% NaC1*發(fā)酵管 3% NaC1*發(fā)酵管 20支 BR
普通瓊脂斜面培養(yǎng)基(PH8.0-8.2)250分離培養(yǎng)霍亂弧菌，*檢定用incubationmedia普通瓊脂斜面培養(yǎng)基(PH8.0-8.2)250分離培養(yǎng)霍亂弧菌，*檢定用
菌素紙片(30ug/片) 10片/瓶 用于空腸彎曲菌藥敏試驗(yàn)。
營(yíng)養(yǎng)鹽瓊脂250g用于檢測(cè)紡織品的抗真菌活性
改良BPLS瓊脂 250(g) incubation media 改良BPLS瓊脂 250(g)
3.5% NaC1*發(fā)酵管 3.5% NaC1*發(fā)酵管 20支 BR
*高鹽瓊脂250用于*的選擇性分離培養(yǎng)incubationmedia*高鹽瓊脂250用于*的選擇性分離培養(yǎng)
Cephalosporinstrip
Nutrient-saltsAgar
XLT4瓊脂 250(g) incubation media XLT4瓊脂 250(g)
1% NaC1纖維二糖發(fā)酵管 1% NaC1纖維二糖發(fā)酵管 20支 BR
抗生素檢定培養(yǎng)基4號(hào)250用于*等的效價(jià)測(cè)定incubationmedia抗生素檢定培養(yǎng)基4號(hào)250用于*等的效價(jià)測(cè)定
萘啶酮酸紙片(30ug/片) 10片 用于空腸彎曲菌藥敏試驗(yàn)。
ker 瓊脂基礎(chǔ) 1000(g) incubation media Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ) 1000(g)
*脫羧酶肉湯發(fā)酵管 *脫羧酶肉湯發(fā)酵管 20支 BR
真菌瓊脂培養(yǎng)基250用于無(wú)菌生長(zhǎng)試驗(yàn)incubationmedia真菌瓊脂培養(yǎng)基250用于無(wú)菌生長(zhǎng)試驗(yàn)
TTC(氮藍(lán)四唑) 10g 添加于TTC瓊脂基礎(chǔ)中
〖CAS號(hào)〗：603-48-5
C25H31N3=373.53
〖級(jí)別〗：BR
〖含量〗：≥99.0%
〖熔點(diǎn)〗：175～180℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色至灰白色或淡紫色粉末。溶于甲醇（C=0.01g/L in 0.1N HC1 in methanol）。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)使用前，在P2O5干燥器中干燥48小時(shí)以上，以除去水分。使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)，避免吸入或與皮膚接觸。產(chǎn)品開封后，應(yīng)盡快恢復(fù)密封狀態(tài)，在規(guī)定條件下〖保存〗
〖保存〗：RT，避光
隱色孔雀石綠
〖英文名
