填入法 DNA 末端標記試劑盒 B5次圖片磷酸化反應(前反應):
1. 在微量離心管中制備下列反應液:
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
填入法 DNA 末端標記試劑盒 B5次圖片使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第
8 步之后進行。
產品介紹:
磷酸化反應標記:
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
YeastExtractGlucoseOxytetracyclineAgar
半固體營養瓊脂 250(g) incubation media 半固體營養瓊脂 250(g)
1% NaC1乳糖發酵管 1% NaC1乳糖發酵管 20支 BR
明膠培養基基礎250生化試驗培養基,用于細菌明膠液化試驗(GB標準)incubationmedia明膠培養基基礎250生化試驗培養基,用于細菌明膠液化試驗(GB標準)
Preston肉湯基礎 250g 用于空腸彎曲桿菌的選擇性增菌
馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂250g用于椰毒假單胞酵米面亞種的產毒培養
RVS肉湯 250(g) incubation media RVS肉湯 250(g)
3% NaC1乳糖發酵管 3% NaC1乳糖發酵管 20支 BR
綠膿菌素測定培養基(PDP)250用于綠膿桿菌的綠膿菌素測定試驗(GB標準)incubationmedia綠膿菌素測定培養基(PDP)250用于綠膿桿菌的綠膿菌素測定試驗(GB標準)
PrestonBrothBase
PotatoDextroseSemisolidAgar
MKTTn肉湯基礎 250(g) incubation media MKTTn肉湯基礎 250(g)
3.5% NaC1乳糖發酵管 3.5% NaC1乳糖發酵管 20支 BR
乳糖膽鹽培養基250用于化妝品中糞大腸菌的測定(GB標準)incubationmedia乳糖膽鹽培養基250用于化妝品中糞大腸菌的測定(GB標準)
改良CCD瓊脂基礎(mCCD) 250g 用于彎曲桿菌的分離培養(GB標準)
沙氏葡萄糖瓊脂(USP)250g用于真菌的分離培養
M肉湯 250(g) incubation media M肉湯 250(g)
5%乳糖發酵管 5%乳糖發酵管 20支 BR
TTC*-吐溫80-營養瓊脂250用于化妝品中細菌總數測定(GB標準)incubationmediaTTC*-吐溫80-營養瓊脂250用于化妝品中細菌總數測定(GB標準)
CCDABase
SabouraudDextroseAgarMedium
煌綠肉湯增菌液基礎 250(g) incubation media 煌綠肉湯增菌液基礎 250(g)
1% NaC1阿拉伯糖發酵管 1% NaC1阿拉伯糖發酵管 20支 BR
HC瓊脂基礎250用于化妝品中霉菌總數測定(Acumedia方法)incubationmediaHC瓊脂基礎250用于化妝品中霉菌總數測定(Acumedia方法)
Bolton肉湯 250g 用于空腸彎曲菌的增菌(GB標準)
酪蛋白葡萄糖瓊脂250g用于霉菌、酵母菌等的分離培養
Rustigian氏尿素培養基基礎 250(g) incubation media Rustigian氏尿素培養基基礎 250(g)
3% NaC1阿拉伯糖發酵管 3% NaC1阿拉伯糖發酵管 20支 BR
改良LETHEEN瓊脂基礎250用于化妝品中微生物檢測(Acumedia方法)incubationmedia改良LETHEEN瓊脂基礎250用于化妝品中微生物檢測(Acumedia方法)
BoltomBroth
SabouraudDextroseAgar
克氏枸櫞酸鹽培養基 250(g) incubation media 克氏枸櫞酸鹽培養基 250(g)
3.5% NaC1阿拉伯糖發酵管 3.5% NaC1阿拉伯糖發酵管 20支 BR
液體硫乙醇酸鹽培養基(不含瓊脂)250用于混濁制品需氧菌無菌試驗(GB標準)incubationmedia液體硫乙醇酸鹽培養基(不含瓊脂)250用于混濁制品需氧菌無菌試驗(GB標準)
Mueller-Hinton瓊脂(MHA) 250g 用于彎曲桿菌的藥物敏感性試驗
沙氏葡萄糖瓊脂(含*)250g用于霉菌和酵母菌的分離培養
MIO培養基 100(g) incubation media MIO培養基 100(g)
1% NaC1蔗糖發酵管 1% NaC1蔗糖發酵管 20支 BR
YPD瓊脂250用于測定酵母菌總數(GB標準)incubationmediaYPD瓊脂250用于測定酵母菌總數(GB標準)
Mueller-HintonAgar
Sabouraud-glucoseAgarwithChloramphenicol
煌綠磺胺瓊脂(BGS瓊脂) 250(g) incubation media 煌綠磺胺瓊脂(BGS瓊脂) 250(g)
3% NaC1蔗糖發酵管 3% NaC1蔗糖發酵管 20支 BR
抗生素檢定培養基H)250用于*,,*,等效價測定incubationmedia抗生素檢定培養基H)250用于*,,*,等效價測定
茚三酮溶液 5ml*2 用于空腸彎曲菌的檢測。
C20H6I4Na2O5=879.88
〖級別〗:IND
〖含量〗(干品計):≥80.0%
靈敏度試驗:合格
水溶解試驗:合格
〖干燥失重〗:≤8.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:棕色粉末。溶于水溶液呈櫻紅色,溶于乙醇。加鹽 酸于水液中析出黃棕色沉淀,加氫氧生成紅色沉淀,但能溶于過量試劑中。zui大吸收波長(水中)524nm、(95%乙醇中) 531nm。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)沉淀滴定的吸附指示 劑。酸堿滴定熒光指示劑,pH大于2.5無熒光,pH不小于4.0呈淺綠色熒光。光度測定試劑。生物染色劑
〖保存〗:RT,避光
隱色結晶紫
〖英文名稱〗:LCV;Leucocrystal Violet; 4,4',4''-Methylidynetris(N,N-dimethylaniline);Leuco Crystal Violet
〖其他名稱〗:隱性結晶紫;無色結晶紫;退色結晶紫;三(對二甲氨基苯基)甲烷
稱〗:Leuco