填入法 DNA 末端標記試劑盒 C5次價格使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第
8 步之后進行。
填入法 DNA 末端標記試劑盒 C5次價格產品介紹:
磷酸化反應標記:
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應(前反應):
1. 在微量離心管中制備下列反應液:
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
麥芽汁培養基250g用于霉菌和酵母菌增菌培養
乳糖肉湯(LB) 250(g) incubation media 乳糖肉湯(LB) 250(g)
葡萄糖銨發酵管 葡萄糖銨發酵管 20支 BR
SCDLP液體培養基250用于化妝品樣品制備,前增菌培養(GB標準)incubationmediaSCDLP液體培養基250用于化妝品樣品制備,前增菌培養(GB標準)
CCDASupplement
MaltExtractMedium
賴氨酸鐵瓊脂(LIA) 250(g) incubation media 賴氨酸鐵瓊脂(LIA) 250(g)
葡萄糖發酵管 葡萄糖發酵管 20支 BR
*吐溫80營養瓊脂250用于化妝品細菌總數測定(GB標準)incubationmedia*吐溫80營養瓊脂250用于化妝品細菌總數測定(GB標準)
Campy-Cefex瓊脂基礎 250g 用于彎曲桿菌分離培養(FDA方法)
YPD液體培養基250g用于酵母菌的增菌培養
EF-18瓊脂 250(g) incubation media EF-18瓊脂 250(g)
酚紅葡萄糖肉湯發酵管 酚紅葡萄糖肉湯發酵管 20支 BR
乙酰胺瓊脂250用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(GB標準)incubationmedia乙酰胺瓊脂250用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(GB標準)
Campy-CefexAgarBase
YPDBroth
酚紅煌綠瓊脂 250(g) incubation media 酚紅煌綠瓊脂 250(g)
麥芽糖發酵管 麥芽糖發酵管 20支 BR
十六烷*基*瓊脂250用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(GB標準)incubationmedia十六烷*基*瓊脂250用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(GB標準)
Campy-Cefex添加劑 2ml*5 每支添加于200ml Campy-Cefex 瓊脂基礎中
酵母浸出物葡萄糖*瓊脂培養基250g用于乳和乳制品中酵母菌和霉菌的計數
水瓊脂培養基 250(g) incubation media 水瓊脂培養基 250(g)
乳糖發酵管 乳糖發酵管 20支 BR
*發酵培養基250生化試驗培養基,用于細菌(如*)*發酵試驗(GB標準)incubationmedia*發酵培養基250生化試驗培養基,用于細菌(如*)*發酵試驗(GB標準)
Campy-CefexSupplement
〖級別〗:BS
λmax:503~507nm(H2O)
λmax.2:530~534nm(H2O)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅色粉末,溶于水為大紅色溶液,微溶于酒精和溶纖素,不溶于其他有機溶劑。遇濃硫酸呈藍光紅色,將其稀釋后呈較黃的紅色;遇濃硝酸呈桔紅色溶液,后轉橙色;遇濃鹽酸生成紅色沉淀,稀釋后即溶解。其水溶液加濃鹽酸呈紅色;加氫氧液呈桔棕色。染色時遇銅離子使色澤帶藍光而暗;遇〖鐵〗離子色澤帶藍光而淺。勻染性好。Colour Index Number 18050
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)染色劑
〖保存〗:RT
赤蘚紅
〖英文名稱〗:Tetraiodofluorescein sodium salt;Erythrosin; Sodium tetraiodofluorescein;Iodeosine;Erythrosine BS; Pyrosine B;Dianthine B;Erythrosin B
〖其他名稱〗:藻紅;藻紅B;酸性地衣紅;2′,4′,5′,7′-四碘熒光素二鈉;四碘熒光素二鈉;藻紅B 鈉鹽;赤蘚紅B;潤滑劑X-1;N,N'-亞乙基雙硬脂酰胺;螺異苯并呋喃-1(3H),9’-[9H]占噸-3-酮-3’,6’-二羥基-2’,4’,5’,7’-四碘代二鈉鹽;四碘熒光素B;酸性紅51
〖CAS號〗:16423-68-0或568-63-8
malachite G