*標記 dUTP 溶液50μL圖片磷酸化反應(前反應):
1. 在微量離心管中制備下列反應液:
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
*標記 dUTP 溶液50μL圖片使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第
8 步之后進行。
*標記 dUTP 溶液50μL圖片產品介紹:
*標記 dUTP 溶液50μL圖片磷酸化反應標記:
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
沙氏葡萄糖瓊脂培養基(含*)250g用于真菌的分離培養
賴氨酸脫羧酶培養基 5(g) incubation media 賴氨酸脫羧酶培養基 5(g)
衛矛醇半固體發酵管 衛矛醇半固體發酵管 20支 BR
LPM瓊脂250用于單增李氏菌選擇性分離(加入七葉苷和檸檬酸鐵銨)(FDA標準)incubationmediaLPM瓊脂250用于單增李氏菌選擇性分離(加入七葉苷和檸檬酸鐵銨)(FDA標準)
TTCAgarBase
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)250g用于霉菌,酵母菌計數(GB/SN標準)
尿素瓊脂基礎 250(g) incubation media 尿素瓊脂基礎 250(g)
V-P半固體瓊脂發酵管 V-P半固體瓊脂發酵管 20支 BR
Half–Fraser培養基250用于李氏菌的增菌培養(MERCK標準)incubationmediaHalf–Fraser培養基250用于李氏菌的增菌培養(MERCK標準)
*培養基 250g 用于彎曲桿菌*耐受性試驗(GB標準)
PotatoDextroseAgar
V-P半固體瓊脂 250(g) incubation media V-P半固體瓊脂 250(g)
3% NaC1V-P半固體發酵管 3% NaC1V-P半固體發酵管 20支 BR
Half–Fraser添加劑5ml*2添加到HB4用于李氏菌的選擇性增菌培養incubationmediaHalf–Fraser添加劑5ml*2添加到HB4用于李氏菌的選擇性增菌培養
GlycineMedium
賴酸培養基(LYS)250g用于野生釀酒酵母的分離
吲哚培養基(又名*肉湯) 10(g) incubation media 吲哚培養基(又名*肉湯) 10(g)
Korser氏肉湯發酵管 Korser氏肉湯發酵管 20支 BR
改良緩沖蛋白胨水(MBP)250用于單增李氏菌前增菌培養incubationmedia改良緩沖蛋白胨水(MBP)250用于單增李氏菌前增菌培養
快速硫化氫試驗瓊脂 250g 用于彎曲桿菌的硫化氫試驗(GB標準)
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(USP)平板9cm*霉菌,酵母菌計數(GB/SN標準)
鈉培養基 10(g) incubation media 鈉培養基 10(g)
丙二酸鹽發酵管 丙二酸鹽發酵管 20支 BR
EB增菌液250用于單增李氏菌選擇性增菌培養(SN標準)incubationmediaEB增菌液250用于單增李氏菌選擇性增菌培養(SN標準)
H2STestMediumAgar
*標記 dUTP 溶液50μL圖片生物染色實驗:合格
PH:9.4~14.0
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:深藍色粉末。易溶于水呈藍色,不溶于乙醇。在濃硫酸中呈紅棕色,當稀釋后呈藍紫色。zui大吸收波長607nm。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)動物組織學的復染劑。原生動物活體染色、細菌染色、神經細胞染色
〖保存〗:RT
7-氨基-4-甲基香豆素
〖英文名稱〗:AMC;7-amino-4-methylcoumarin;Coumarin 120;7-Amino-4-methyl-2H-chromen-2-one;4-Methyl-7-aminocoumarin
〖其他名稱〗:香豆素120
〖CAS號〗:26093-31-2
C10H9NO2=175.18
〖級別〗:試劑級
〖含量〗:≥98.0%
〖熔點〗:224~230℃
nebis(N,N-d