Cy5-dCTP 溶液,10mM25μL圖片磷酸化反應(yīng)(前反應(yīng)):
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液:
2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記:
當(dāng)摻入水平很低的時(shí)候,需要使用本步驟,即通過(guò)體積排阻色譜或過(guò)濾試 劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱(需另購(gòu))對(duì)于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個(gè)堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來(lái)純化長(zhǎng)度不小于 10 個(gè) 堿基的寡核苷酸。
Cy5-dCTP 溶液,10mM25μL圖片使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補(bǔ)足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長(zhǎng) 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無(wú)水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過(guò)第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過(guò)濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請(qǐng)?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
Cy5-dCTP 溶液,10mM25μL圖片產(chǎn)品介紹:
Cy5-dCTP 溶液,10mM25μL圖片磷酸化反應(yīng)標(biāo)記:
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個(gè)微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無(wú)水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
YM培養(yǎng)基250g用于霉菌和酵母菌的增菌培養(yǎng)
彎曲菌血瓊脂基礎(chǔ) 250(g) incubation media 彎曲菌血瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
*顯色培養(yǎng)基 Staphylococcus Chromogenic Medium 1升 用于*的顯色培養(yǎng)
BBL瓊脂培養(yǎng)基250用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))incubationmediaBBL瓊脂培養(yǎng)基250用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
亞鹽瓊脂 250g 用于厭氧亞鹽還原桿菌的試管計(jì)數(shù)(SN標(biāo)準(zhǔn))
YMMedium
Campy-Cefex瓊脂基礎(chǔ) 100(g) incubation media Campy-Cefex瓊脂基礎(chǔ) 100(g)
*顯色培養(yǎng)基配套平皿 Staphylococcus Chromogenic Medium Dish 9㎝/塊
TPY瓊脂培養(yǎng)基250用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))incubationmediaTPY瓊脂培養(yǎng)基250用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
SulfiteAgar
WLN培養(yǎng)基250g用于釀造和工業(yè)發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌、酵母菌和霉菌培養(yǎng)
Campy-Cefex瓊脂基礎(chǔ) 100(g) incubation media Campy-Cefex瓊脂基礎(chǔ) 100(g)
霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基配套平皿 Mould And Yeast Chromogenic Medium Dish 9㎝/塊
PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)250用于雙歧桿菌增菌培養(yǎng),使用時(shí)需加入血紅素和*準(zhǔn))incubationmediaPYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)250用于雙歧桿菌增菌培養(yǎng),使用時(shí)需加入血紅素和*準(zhǔn))
葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 250g 用于嗜熱菌芽孢(需氧芽孢總數(shù),平酸芽孢和厭氧芽孢)分離培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))
WLNMedium
MRS 肉湯(MRS) 250(g) incubation media MRS 肉湯(MRS) 250(g)
阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基 Enterobacter Sakazakii Chromogenic Medium 1升 用于坂崎桿菌的顯色培養(yǎng),坂崎桿菌顯藍(lán)色,其他腸桿菌顯無(wú)色
胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯(TSB-YE)250用于單增李氏菌增菌培養(yǎng)(SN、GB標(biāo)準(zhǔn))incubationmedia胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯(TSB-YE)250用于單增李氏菌增菌培養(yǎng)(SN、GB標(biāo)準(zhǔn))
GlucoseTryptoneAgar
氯硝胺(DG250g用于蜂蜜中嗜滲酵母計(jì)數(shù)
MRS 瓊脂(MRSA) 250(g) incubation media MRS 瓊脂(MRSA) 250(g)
*12測(cè)定用培養(yǎng)基 Vitamin B12 Assay Broth 250克 嬰兒食品和乳粉中*12測(cè)定
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSA-YE)250用于單增李氏菌的分純,培養(yǎng),可用于做7%羊血瓊脂(SN標(biāo)準(zhǔn))incubationmedia胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSA-YE)250用于單增李氏菌的分純,培養(yǎng),可用于做7%羊血瓊脂(SN標(biāo)準(zhǔn))
BAT培養(yǎng)基 250g 用于檢測(cè)果汁中耐熱嗜酸菌
DGar
改良克氏雙糖鐵瓊脂 250(g) incubation media 改良克氏雙糖鐵瓊脂 250(g)
支原體瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基 Mycoplasma Agar Base 250克 用于支原體的分離培養(yǎng)
李氏菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MMA)250用于單增李氏菌選擇性分離incubationmedia李氏菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MMA)250用于單增李氏菌選擇性分離
BATMedium
Cy5-dCTP 溶液,10mM25μL圖片zui大吸收波長(zhǎng):506~510nm
吸光度試驗(yàn):530~540
吸光度之比(250nm/260nm):0.95~1.00
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅色至褐色粉末,溶于水(30mg/mL),溶于水呈橙紅色溶液,微溶于乙醇和乙二醇乙迷,不溶于多數(shù)有機(jī)溶劑。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗:RT
間甲酚紫
〖英文名稱(chēng)〗:m-Cresol purple;Cresol Purple
〖其他名稱(chēng)〗:間甲*紫;間甲酚磺酞;間甲酚磺酰酞;3,3'-二甲基*;燦爛甲酚紫;甲*紫;甲酚固紫;間甲*紫
〖CAS號(hào)〗:2303-01-7
6152-67-6