暗盒 (8×10 英寸 )1個說明書磷酸化反應(前反應):
1. 在微量離心管中制備下列反應液:
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
暗盒 (8×10 英寸 )1個說明書使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第
8 步之后進行。
暗盒 (8×10 英寸 )1個說明書產品介紹:
暗盒 (8×10 英寸 )1個說明書磷酸化反應標記:
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
DNA Shuffling 試劑盒 10 次 6- 羧基二乙酸熒光素
核苷酸類似物法易錯 PCR 試劑盒 15 次 章魚堿
即用型長片段 PCR 試劑盒 20 次 D- 甘露糖
即用型高保真 PCR 試劑盒 1.5mL 二硫蘇糖醇 (DTT)
即用型高保真 PCR 試劑盒 9mL N- 苯甲酰 -L- *乙酯
即用型多重 PCR 試劑盒 50 次 5′ - 三磷酸鳥苷三鈉
即用型熒光定量 PCR 試劑盒 100 次 葡萄糖 -6- 磷酸二鈉
即用型熒光定量 PCR 試劑盒 600 次 異丙基 -β-D- 硫代半乳糖苷
Real-Time PCR 稀釋液 1mL 鄰硝基苯 -β-D- 吡喃半乳糖苷
ROX 參考染料 200μL 葡聚糖凝膠 G-75 中顆粒
ROX 參考染料 II 100μL S1 核酸酶
cDNA *鏈合成試劑盒 10 次 β -瓊脂糖酶
cDNA *鏈合成試劑盒 50 次 透明質酸酶
暗盒 (8×10 英寸 )1個說明書BENZAMIDINEHYDROCHLORIDE芐脒,HCl蛋白組學級白色精細結晶粉末COLDsigma
DL-LysineDL-2,6-二*5克BR,99%
GLYCEROL,STERILE無菌甘油蛋白組學級無色液體RTsigma
DL-Alaninemethylesterhydrochloride甲酯鹽酸鹽1克BR,98%
LEUPEPTIN亮抑酶肽蛋白組學級無色,無定形粉末FROZENsigma
Diphenylamine氨基二苯500毫克BR
TRACKINGDYE,2D2D蛋白電泳指示染料蛋白組學級紅色溶液COLDsigma
Dimethylmalonate甲酯100克CP,98%
DETERGENTSAMPLER,PEROXIDE-FREE去垢劑樣品,無過氧化物蛋白組學級RTsigma
Diacetylmonoxime2,3-丁二酮一肟100毫克AR,98%
LPNEXTGEL®KIT大蛋白NEXT 膠電泳試劑盒蛋白組學級RTsigma
dFdCyd吉西他賓鹽酸鹽100毫克組織培養級,γ-射線滅菌
TURBONEXTGEL®7.5%Turbo NEXT膠,7.5%蛋白組學級RTsigma
名或英文