4× 核酸液相雜交液10mL圖片產品介紹：

4× 核酸液相雜交液10mL圖片使用方法: 
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時，請在第
8 步之后進行。
4× 核酸液相雜交液10mL圖片磷酸化反應標記：
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
4× 核酸液相雜交液10mL圖片磷酸化反應（前反應）：
1. 在微量離心管中制備下列反應液：

2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。

明膠溶液，2%，PCR     1.5mL    硫酸*
高 GC DNA 清除劑，PCR     1.5mL    碘化丙啶苯
MnCl2溶液，25mM，PCR     5mL    活性藍 19
甲酰胺，PCR     5mL    馬來酸鈉
MgSO4溶液，10mM，PCR     5mL    硼氫化氰鈉
石蠟油，PCR     10mL    乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺
DMSO，PCR     1.5mL    多聚 -L- 賴氨酸 (15-30 萬 )
海藻糖溶液，1.5M，PCR     1.5mL    多聚 -L- 賴氨酸 (3-7 萬 )
甜菜堿溶液，5M，PCR     1.5mL    多聚 -L- 賴氨酸 (7-15 萬 )
綠如藍染料，PCR     0.1mL    D- 果糖 -6- 磷酸二鈉
綠如藍染料，PCR     1mL    *抑制劑
dNTP 溶液 ,10mM    0.5mL    Nα- 苯甲酰*乙酯
dNTP 溶液 ,10mM    5mL    二甲苯青
dNTP 溶液，2.5mM    0.5mL    疊氮鈉
dNTP 溶液，2.5mM    5mL    聚蔗糖 400
dNTP 溶液，100mM     0.5mL    L- * ( 氧化型 )
dNTP 溶液，100mM     5mL    L-(+) 乳酸鋰鹽
dUTP 溶液，100mM     0.4mL    α- 氰基 -4- 羥基肉桂酸
dITP 溶液，2.5mM    2mL    天狼猩紅

4× 核酸液相雜交液10mL圖片L-PROLINEL-*美國藥典級白色至米白色粉末RTsigma
Hypoxanthine6-羥基嘌呤100毫克USP級，900mcg/mg
NUCLEASELIMINATOR™去除核酸酶紙巾生物技術級RTsigma
H-Pro-OBzl•HClL-*芐酯鹽酸鹽5克特純，98.0%
HISTOCHOICE®MB(MOLECULARBIOLOGY)TISSUEFIXATIVE,1X分子生物學組織固定劑組織學級無色至微黃無混濁液體RTsigma
Histaminedihydrochloride組胺雙鹽酸鹽1克BR，99%
AGAROSESFR™超高分辨率瓊脂糖生物技術級白色精細粉末RTsigma
Heptanoicacid葡萄花酸1克BR，97%
IPTGULTRAPUREIPTG超純級白色結晶粉末FROZENsigma
Gumtragacanthpowder西黃蓍膠粉5克GR，99.5%
inol，