血管平滑肌細(xì)胞；T/G HA－VSMC復(fù)蘇來(lái)源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。

細(xì)胞名稱(chēng)  血管平滑肌細(xì)胞；T/G HA－VSMC復(fù)蘇
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性  貼壁生長(zhǎng)
特征特性   T/G HA-VSMC細(xì)胞建系于1992年（Tilberg A F，et al）。該細(xì)胞系屬有限細(xì)胞系，可因連續(xù)傳代而衰老死亡。連續(xù)傳代試驗(yàn)顯示，T/G HA-VSMC細(xì)胞經(jīng)歷15-20個(gè)群體倍增時(shí)間就會(huì)衰老死亡，固需控制有限的傳代次數(shù)。 
培養(yǎng)條件   F12K  10%FBS；加多種生長(zhǎng)因子，詳見(jiàn)參考文獻(xiàn)
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C15
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  陰性
STR   STR鑒定
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類(lèi)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量*，使*的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
 Ig-j(Human immunoglubin joining chain) ELISA Kit  *j鏈    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
HB- Beta(Human Beta-subunits of hemoglobin) ELISA Kit  人血紅蛋白β亞基    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
SIgA(Human secretory immunoglobulin A) ELISA Kit  人分泌型免疫球蛋白A    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
SIgA(Human secretory immunoglobulin A) ELISA Kit  人分泌型免疫球蛋白A（人唾液）    Multi-class antibodies    規(guī)格：     96T
F XII a(Human activated coagulation factor XII ) ELISA Kit  人活化*Ⅻ    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Free Protein S,FP-S ELISA Kit  人游離蛋白S    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
APT(Human Abnormal prothrombin) ELISA Kit  人異常*原    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
CIC(Human circulating immune complex) ELISA Kit  人循環(huán)免疫復(fù)合物    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
PA-IgM(Human Plaet associated antibody) ELISA Kit  人血小板相關(guān)抗體IgM    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
FPA(Human fibrinopeptide A) ELISA Kit  人血纖肽/纖維蛋白肽A    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Plg(Human Plasminogen) ELISA Kit  人纖溶酶原    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48TGLI4    英文名稱(chēng)：    轉(zhuǎn)錄因子Gli4/鋅指蛋白gli4抗體    ?0.2ml
Gliadin    英文名稱(chēng)：    麥角蛋白抗體    ?0.2ml
GLIPR1L1    英文名稱(chēng)：    膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白1抗體    ?0.2ml
GLT25D1    英文名稱(chēng)：    糖基轉(zhuǎn)移酶25結(jié)構(gòu)域1/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1抗體    ?0.2ml
GLS2    英文名稱(chēng)：    *酰胺水解酶抗體    ?0.2ml
GLT25D2    英文名稱(chēng)：    糖基轉(zhuǎn)移酶25結(jié)構(gòu)域2/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移酶2抗體    ?0.2ml
GLT28D1    英文名稱(chēng)：    糖基轉(zhuǎn)移酶28家族1抗體    ?0.2ml
GLT6D1    英文名稱(chēng)：    糖基轉(zhuǎn)移酶6結(jié)構(gòu)1抗體    ?0.2ml
GLTSCR2    英文名稱(chēng)：    膠質(zhì)瘤抑癌候選基因2抗體    ?0.2ml
Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser226)    英文名稱(chēng)：    磷酸化糖皮質(zhì)激素受體抗體    ?0.1ml
GLUT6    英文名稱(chēng)：    葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6抗體    ?0.2ml

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