人正常眼瞼上皮細(xì)胞；HNEEC/HL-014特性來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。

細(xì)胞名稱  人正常眼瞼上皮細(xì)胞；HNEEC/HL-014特性
形態(tài)特性   上皮樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況  C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量*，使*的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
phospho-HDAC6 (Ser22)    英文名稱：    磷酸化組蛋白去乙酰化酶6抗體    ?0.1ml
HDAC7    英文名稱：    組蛋白去乙酰化酶7抗體    ?0.1ml
phospho-HDAC7 (Ser358)    英文名稱：    磷酸化組蛋白去乙酰化酶7抗體    ?0.1ml
HDAC8    英文名稱：    組蛋白去乙酰化酶8抗體    ?0.1ml
Phospho-HER4 (Tyr984)    英文名稱：    磷酸化HER4抗體    ?0.1ml
HARS    英文名稱：    *tRNA連接酶抗體    ?0.2ml
NDV HN protein    英文名稱：    雞新城疫血凝素－神經(jīng)氨酸酶抗體    ?1ml
HSP105    英文名稱：    熱休克蛋白105抗體    ?0.1ml
HNF1    英文名稱：    肝細(xì)胞核因子1α抗體    ?0.2ml
HIF-1 beta    英文名稱：    缺氧誘導(dǎo)因子1β /HIF-1β抗體    ?0.1ml
HSTF2    英文名稱：    熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體    ?0.1ml
HA tag    英文名稱：    HA tag標(biāo)簽抗體    ?0.1mluman Vacuolating cytotoxin A,VacA ELISA Kit  人空泡毒素相關(guān)蛋白A    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human vitronectin,VNR ELISA Kit  人玻連蛋白/體外粘連蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human vimentin,VIM ELISA Kit  人波形蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Surfactant Protein D,SP-D ELISA Kit  人表面活蛋白D    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human arabinogalactan proteins,AGPs ELISA Kit  人阿拉伯半乳糖蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Beta Lactoglobulin, Beta-Lg ELISA Kit  人β乳球蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Beta catenin, Beta-Cat ELISA Kit  人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Beta amyloid precursor protein, BetaAPP ELISA Kit  人淀粉樣前體蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human beta2 glycoprotein, Beta2-GP ELISA Kit  人β2糖蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Alpha Lactalbumin, Alpha-La ELISA Kit  人α乳清蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKP ELISA Kit   人N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-*    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Lactoferrin,LTF/LF ELISA kit  人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Neuroglobin,NGB ELISA Kit   人腦紅蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T

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