細(xì)胞名稱  人正常主氣管上皮細(xì)胞；HNTEC/HL-013培養(yǎng)
形態(tài)特性   上皮樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況  C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  未定

復(fù)蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
HHuman rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit  人的牛血清白蛋白殘留檢測    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human amyloid beta peptide 1-40,A Beta1-40 ELISA Kit  人β淀粉樣蛋白1-40    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human myelin basic protein,MBP ELISA Kit  人髓磷脂堿蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human High mobility group protein B1,HMGB-1 ELISA Kit  人高遷移率族蛋白B1    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human desmin,Des ELISA Kit  人結(jié)蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Soluble protein-100,S-100 ELISA Kit  人S100蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Soluble protein-100B,S-100B ELISA Kit  人S100B蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA Kit   人巨噬細(xì)胞炎蛋白2    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human gelson ELISA Kit  人凝膠原蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human talin ELISA Kit  人踝蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit  人角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human ox-LDL ELISA Kit  人氧化低密度脂蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48THIG1    英文名稱：    缺氧誘導(dǎo)基因1蛋白抗體    ?0.2ml
HCG alpha(4A8)    英文名稱：    人絨毛膜促腺激素α 亞基單抗    ?0.1ml
HBsAg(H2F4)    英文名稱：    人乙型肝炎表面抗原單克隆抗體（檢測）    ?0.1ml
HBeAg (2E9)    英文名稱：    人乙型肝炎e抗原單克隆（包被）抗體    ?0.1ml
HBeAg(2E6)    英文名稱：    人乙型肝炎e抗原單克隆（檢測）抗體    ?0.1ml
hHb(H5A3)    英文名稱：    小鼠抗人血紅蛋白單克隆抗體    ?0.2ml
H1N1 Hemagglutinin 1    英文名稱：    甲型流感病毒血凝素抗體    ?0.2ml
Phospho-HER2(Tyr1112)    英文名稱：    磷酸化HER2受體抗體    ?0.1ml
HDAC4    英文名稱：    組蛋白去乙酰化酶4抗體    ?0.1ml
Phospho-HER2 (Tyr1221 + Tyr1222)    英文名稱：    磷酸化HER2受體抗體    ?0.1ml