人類成纖維細胞系；CNLMG-B5538SKIN復(fù)蘇來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學(xué)實驗等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實驗室，可無菌操作并提供相關(guān)科研項目解決方案以及實驗服務(wù)。

細胞名稱  人類成纖維細胞系；CNLMG-B5538SKIN復(fù)蘇
形態(tài)特性   成纖維細胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況  C8
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  未定

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
HEBP1    英文名稱：    血紅素結(jié)合蛋白1抗體    ?0.2ml
Hemoglobin alpha    英文名稱：    血紅蛋白α抗體    ?0.1ml
Haptoglobulin beta    英文名稱：    結(jié)合球蛋白β抗體    ?0.2ml
HIAT1    英文名稱：    海馬豐富基因轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體    ?0.2ml
Histone H2A.Z    英文名稱：    組蛋白H2AZ抗體    ?0.2ml
HSF2 binding protein    英文名稱：    熱休克因子2結(jié)合蛋白抗體    ?0.2ml
HEATR2    英文名稱：    HEATR2蛋白抗體    ?0.2ml
HBLD2    英文名稱：    鐵硫簇整合同源物2蛋白抗體    ?0.2ml
MV hemagglutinin glycoprotein    英文名稱：    麻疹病毒血凝素抗體    ?0.2ml
HOXC5    英文名稱：    同源盒蛋白HOXC5抗體    ?0.2ml
HES4    英文名稱：    轉(zhuǎn)錄因子HES4抗體    ?0.2mlIL-21 ELISA Kit   大鼠白介素21    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
D-LDH ELISA Kit   大鼠D-乳酸脫氫酶    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
TARC/CCL17 ELISA Kit  大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
CH ELISA Kit  大鼠*    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
TG ELISA Kit  大鼠甘油三酯    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
TG ELISA Kit(human)  人甘油三酯    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
lipofuscin kit(human)  人脂褐素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
LDL ELISA Kit   大鼠低密度脂蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
HDL ISA Kit  大鼠高密度脂蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
PGR ELISA Kit   大鼠孕酮受體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T

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