【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱  人皮膚成纖維細胞；HSAS4使用說明書
形態特性   成纖維細胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞系來源于一男性的皮膚組織。2005年由*昆明細胞庫建立。 
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS
傳代方法   1：2傳代；3-4天一次
傳代情況  P2
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  熒光法（-）
STR   Amelogenin：XY；D8S1179：11,13；D21S11：29,31；D7S820：10,11；CSF1PO：10,13；D3S1358：16；TH01： 9；D13S317：8，11；D16S539： 12；D2S1338：20,21；D19S433：13；vWA：14,18；THOX：8, 11；D18S51：15,17；D5S818：11, 12；FGA：21,24。
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點： 
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。 
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。 
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。 
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Pentosidine ELISA Kit  大鼠戊糖素    Multi-class antibodies    規格：     48T
AGEs ELISA Kit  大鼠晚期糖基化終末產物    Multi-class antibodies    規格：     48T
NGAL ELISA Kit  大鼠中粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白    Multi-class antibodies    規格：     48T
Hp-IgG ELISA Kit  大鼠幽門螺旋菌IgG    Multi-class antibodies    規格：     48T
ER ELISA Kit   大鼠雌激素受體    Multi-class antibodies    規格：     48T
Beta-DF ELISA Kit  大鼠β-防御素    Multi-class antibodies    規格：     48T
D1R ELISA Kit  大鼠多巴胺D1受體    Multi-class antibodies    規格：     48T
ADRA1A ELISA Kit   大鼠腎上腺素能a1A受體    Multi-class antibodies    規格：     48T
CR ELISA Kit  大鼠鈣結合蛋白    Multi-class antibodies    規格：     48T
HABP ELISA Kit  大鼠透明質酸結合蛋白    Multi-class antibodies    規格：     48THSyndecan 2/heparin sulphate protoglycans 1    英文名稱：    硫酸肝素糖蛋白1抗體抗體    ?0.2ml
HFH-4    英文名稱：    叉頭蛋白J1抗體    ?0.1ml
HIV p55+NP7    英文名稱：    艾滋病病毒抗體    ?0.2ml
HIV p55+P6-Gag    英文名稱：    艾滋病病毒抗體    ?0.2ml
HIV1 p55+p17    英文名稱：    艾滋病病毒抗體    ?0.2ml
HPR    英文名稱：    結合珠蛋白相關蛋白抗體    ?0.2ml
HDC    英文名稱：    L-*脫羧酶抗體    ?0.1ml
HBXIP    英文名稱：    乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白    ?0.2ml
Histone H2B.s    英文名稱：    組蛋白H2B.s抗體    ?0.2ml
HDAC4 + 5 + 9    英文名稱：    組蛋白去乙酰化酶4+5+9抗體    ?0.2ml