細(xì)胞名稱(chēng)  人胚腎二倍體細(xì)胞；HEK-2使用說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性  貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞系來(lái)自一女性胎兒的正常腎組織。*昆明細(xì)胞庫(kù)于1986年建立。 
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)   10%FBS
傳代方法   1:2傳代；3-4天一次
傳代情況  P4
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  熒光法（-）
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類(lèi)

復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
Bid ELISA Kit  大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Casp-9 ELISA Kit   大鼠胱天蛋白酶9    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Orexin A ELISA Kit  大鼠阿立新A    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Casp-3 ELISA Kit  大鼠胱天蛋白酶3    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Bcl-2 ELISA Kit  大鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
CXCR3 ELISA Kit  大鼠CXC趨化因子受體3    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
NE ELISA Kit  大鼠中粒細(xì)胞彈蛋白酶    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
TSGF ELISA Kit  大鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Hyp ELISA Kit  大鼠羥*    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
OPGL ELISA Kit  大鼠骨保護(hù)素配體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
LF/LTF ELISA Kit  大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
EMA IgA ELISA Kit  大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48TH5N1 Hemagglutinin    英文名稱(chēng)：    A型流感病毒H5N1凝集素抗體    ?1ml
H1N1++H3N2 nucleocapsid protein    英文名稱(chēng)：    A型流感病毒核衣殼蛋白抗體    ?0.2ml
H1N1+H5N1+H3N2 nucleocapsid protein    英文名稱(chēng)：    A型流感病毒核衣殼蛋白抗體    ?0.1ml
H1N1+H5N1+H3N2 nucleocapsid protein    英文名稱(chēng)：    A型流感病毒核衣殼蛋白抗體    ?0.2ml
Haemophilus influenza B    英文名稱(chēng)：    B型流感病毒蛋白抗體    ?0.2ml 
HPV16-E7    英文名稱(chēng)：    人類(lèi)狀瘤病毒16-E7抗體    ?0.2ml
Hepsin    英文名稱(chēng)：    跨膜蛋白酶*1抗體    ?0.2ml
HLC3    英文名稱(chēng)：    肺癌癌基因蛋白3抗體    ?0.2ml
High density lipoprotein    英文名稱(chēng)：    高密度脂蛋白抗體    ?0.1ml
HEF1    英文名稱(chēng)：    蛋白激酶底物相關(guān)蛋白抗體    ?0.2ml