【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱  人胚腎上皮細胞；GC-293T培養(yǎng)
形態(tài)特性   上皮樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件    10%FBS
傳代方法   無
傳代情況  1:3傳代，3-4天傳1次
凍存條件   C5
支原體檢測  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
STR   陰性
同工酶  
染色體   未做

復蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
TAFI ELISA Kit  大鼠纖溶抑制因子/*激活的纖溶抑制物    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
GP- II b III a/CD41+CD61 ELISA Kit  大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
TSP-1 ELISA Kit  大鼠血小板反應蛋白/*敏感蛋白1    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
ON ELISA Kit  大鼠骨粘連蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
FFA ELISA Kit  大鼠游離脂肪酸    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
FA ELISA Kit  大鼠*    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
histon-H2b ELISA Kit  大鼠組蛋白H2b    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
NT-proBNP ELISA KIT  大鼠N端前腦鈉素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
GR ELISA Kit  大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
LHRH ELISA Kit  大鼠黃體生成素釋放激素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
8-iso-PG ELISA Kit  大鼠8異前列腺素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
IFI16/p16 ELISA Kit  大鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit   大鼠基質(zhì)細胞衍生因子1a    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
GMP-140 ELISA Kit   大鼠血漿α顆粒膜蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
MPO ELISA Kit  大鼠髓過氧化物酶    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48Tphospho-HMGCR(Ser872)    英文名稱：    磷酸化三羥基*基*還原酶抗體    ?0.1ml
HSD3a    英文名稱：    羥基類固醇脫氫酶3α抗體    ?0.2ml
HLX1    英文名稱：    同源異型盒基因HLX1蛋白抗體    ?0.2ml
HMGCS1    英文名稱：    三羥基*基*合成酶1    ?0.2ml
HSF1    英文名稱：    熱休克因子1抗體    ?0.1ml
phospho-HSF1(Ser326)    英文名稱：    磷酸化熱休克因子1抗體    ?0.1ml
Hsc70    英文名稱：    熱休克蛋白71抗體    ?0.1ml
hHBrk1    英文名稱：    微絲相關蛋白hHBrk1抗體    ?0.1ml
HPCL2    英文名稱：    植烷酰*羥化酶2抗體    ?0.2ml
H9N1 Neuraminidase    英文名稱：    A型流感病毒H9N1神經(jīng)氨酸酶型抗體    ?0.2ml
H9N1 Hemagglutinin    英文名稱：    A型流感病毒H9N1血凝素型抗體    ?1ml
HPV33 E7    英文名稱：    人類狀瘤病毒33抗體    ?0.2ml
H1N1 Matrix Protein 1    英文名稱：    A型病毒H1N1蛋白抗體    ?0.1ml