產品名稱 | 人急性T淋巴細胞白血病細胞;Jurkat, Clone E6-1使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 人急性T淋巴細胞白血病細胞;Jurkat, Clone E6-1使用說明書
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞是Jurkat-FHCRC細胞株(Jurkat細胞株的衍生)的一個克隆。Jurkat細胞株來源于一個14歲男孩的外周血;經佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體中的一種誘導后可產生大量IL-2(IL-2的產生需兩種類型的誘導劑);表達T細胞受體、CD3。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 維持細胞濃度在1×105~1×106viable cells/ml;2~3天換液1次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12;D13S317:8,12;D16S539:11;D18S51:13,21;D19S433:14,15.2;D21S11:31.2,33.2;D2S1338:19,23;D3S1358:15;D5S818:9;D7S820:8,12;D8S1179:13,14;FGA:20,21;TH01:6,9.3;TPOX:8,10;vWA:18;
同工酶
染色體 42~46,XY
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
LAR 英文名稱: 受體蛋白*磷酸酶F抗體 ?0.2ml
LIFR 英文名稱: 白血病抑制因子受體抗體 ?0.1ml
lamin A + C 英文名稱: 核纖層蛋白A抗體 ?0.1ml
Lamin B 英文名稱: 核纖層蛋白B抗體(細胞核膜標志物) ?0.1ml
lamin A + C 英文名稱: 核纖層蛋白A/C抗體 ?0.2ml
LRIG2 英文名稱: LRIG2抗體 ?0.2ml
LEF-1 英文名稱: 淋巴增強因子-1抗體 ?0.1ml
LRIG1 英文名稱: LRIG1抗體 ?0.2ml
LRIG3 英文名稱: LRIG3抗體 ?0.2ml
LI-cadherin 英文名稱: 肝腸鈣粘連蛋白抗體 ?0.1ml
Layilin 英文名稱: 透明質酸受體抗體 ?0.1mlAnti-AP2 alpha/FITC 熒光素標記轉錄激活蛋白2α抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-alpha Adaptin/FITC 熒光素標記銜接蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-Apaf-1 /FITC 熒光素標記凋亡蛋白活因子-1抗體(C端)IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-Apaf-1/FITC 熒光素標記凋亡蛋白活因子-1抗體(N端)IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-Protein C/FITC 熒光素標記APC活化蛋白C抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-Apelin/FITC 熒光素標記脂肪炎癥因子Apelin抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-Apelin receptor/APJ receptor /FITC 熒光素標記Apelin receptor抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-APEX1/Ref-1 /FITC 熒光素標記氧化還原因子1抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-APG4B/AUTL1 /FITC 熒光素標記APG4B細胞自噬相關抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-API5/AAC11 /FITC 熒光素標記凋亡抑制因子5抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-APNG/MPG/FITC 熒光素標記N-甲基嘌呤DNA糖基化酶IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-apoA1/FITC 熒光素標記載脂蛋白A1抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-ApoB/FITC 熒光素標記載脂蛋白B抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-apo-D /FITC 熒光素標記載脂蛋白D抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml