【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱  IL-2依賴的人淋巴T細胞系；Kit225－k6培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性  懸浮生長
特征特性   IL-2依賴 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清 10%
傳代方法   2x10-5細胞/ml
傳代情況  
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養(yǎng)法（-）
STR   Amelogenin:X,Y；CSF1PO:10,12；D13S317:9,12；D16S539:9,12；D18S51:11,14；D21S11:30；D3S1358:15；D5S818:10,11,12；D7S820:8,11；D8S1179:14,16；FGA:23,24；PentaD:9,10；PentaE:5；TH01:7,9；TPOX:8,11；vWA:17,19
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Anti-V5 tag/HRP  辣根過氧化物酶標記V5 tag標簽抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-V.cholera Ogawa/FITC  熒光素標記01群小川型霍亂弧菌抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-VCP/p97 /FITC  熒光素標記抗含纈酪肽蛋白抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-V.cholera Ogawa/Biotin  *化01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-V.cholera Ogawa/Biotin  *化01群小川型霍亂弧菌抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-Influenza A Virus H1/HRP  辣根過氧化物酶標記羊抗季節(jié)A型流感病毒H1抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-Influenza A Virus H3/HRP  辣根過氧化物酶標記羊抗季節(jié)流感病毒H3抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-H1N1-A/HRP(Influenza A virus)California  辣根過氧化物酶標記兔抗季節(jié)A型人流感病毒H1N1抗體IgG(美國加州型)    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-CD4/Biotin  *化CD4抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-Integrin AlphaV Beta1/Biotin  *化兔抗人、大、小鼠整合素αVβ1抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-Integrin alpha V/CD51 /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠等整合素αV抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-VDAC/FITC  熒光素標記電壓依賴陰離子通道抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2ml
Anti-CD14/Biotin  *化CD14抗體IgG    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.2mlSPANXB1    英文名稱：    腫瘤/抗原11.2抗體    ?0.1ml
Smoothelin    英文名稱：    平滑肌蛋白抗體    ?0.1ml
SHROOM1    英文名稱：    SHROOM1蛋白抗體    ?0.1ml
Phospho-SirT1 (Ser27)    英文名稱：    磷酸化沉默調節(jié)蛋白1抗體    ?0.1ml
SHC2    英文名稱：    SCK蛋白抗體    ?0.2ml
SLC34A2    英文名稱：    磷酸鈉協同轉運蛋白抗體    ?0.1ml
SORBS2    英文名稱：    *結合蛋白2抗體    ?0.2ml
Sialoadhesin    英文名稱：    唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素1抗體    ?0.2ml
Striatin 3    英文名稱：    細胞周期蛋白SG2N抗體    ?0.2ml
Striatin 4    英文名稱：    STRN4蛋白抗體    ?0.2ml
SCN7A    英文名稱：    鈉離子通道蛋白7α/Na+ CP type VIIα抗體    ?0.1ml
SCN3A    英文名稱：    電壓門控鈉通道SCN3α蛋白/Na+ CP type IIIα抗體    ?0.2ml