【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱  高轉移潛能肝癌細胞；HCCLM3-GFP-LC3培養
形態特性   上皮細胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況  C5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  未定

復蘇操作要點： 
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。 
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。 
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。 
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
伊紅美藍瓊脂（EMB）       250    弱選擇性培養基，用于腸道菌的選擇性分離            
三糖鐵瓊脂（TSI）       250    用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選（葡萄糖，乳糖，蔗糖）            
XLD 瓊脂          250    選擇性培養基，用于志賀氏菌的選擇性培養(FDA標準)            
*瓊脂         250    用于霍亂弧菌的分離培養            
MH 肉湯（MHB）       250    用于抗生素敏感試驗            
MH 瓊脂（MHA）       250    用于抗生素敏感試驗            
中國藍瓊脂         250    弱選擇性培養基，用于腸道致病菌的選擇性分離            
克氏雙糖鐵瓊脂        250    用于細菌復合生化試驗（葡萄糖，乳糖）            
血瓊脂基礎2號    250    供分離營養要求非常高的致病菌用，后加血液制成血平板            
血液瓊脂基礎         250    供分離營養要求較高的致病菌用，后加血液制成血平板            
血液*        250    用于從血液中分離病原菌            
氯化三苯四氮唑-沙保羅培養基      250    用于分離真菌，酵母菌等            
麥康凱瓊脂         250    用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(OXOID方法)            
麥康凱瓊脂(不含鹽)        250    用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(OXOID方法)      CCAP    心動加速蛋白多肽抗體
KCNIP3    鉀通道相互作用蛋白3抗體
C12ORF29    12號染色體開放閱讀框29抗體
C12ORF49    12號染色體開放閱讀框49抗體
D45    白細胞共同抗原抗體
Connexin-36    間隙連接蛋白36抗體
C12ORF61    12號染色體開放閱讀框61抗體
C12ORF63    12號染色體開放閱讀框63抗體
C12ORF68    12號染色體開放閱讀框68抗體
CK15    細胞角蛋白15抗體
C1orf103    1號染色體開放閱讀框103抗體
COMT    兒茶酚O甲基移位酶抗體
C1QTNF9    補體C1qTNF9鏈多肽抗體
CNN2    平滑肌鈣調蛋白CNN2抗體
CMYA2    心肌病相關蛋白2