【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人腦多型膠質母細胞瘤細胞;BT-325培養
形態特性 成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系于1985年由北京神經外科研究所建立。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:3傳代;3-4天一次
傳代情況 PN4
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR Amelogenin:XY;D8S1179:13,15;D21S11:29,32.2;D7S820:12,13;CSF1PO:11, 13;D3S1358:15, 16;TH01:8, 9;D13S317:13;D16S539:9,11;D2S1338:24;D19S433:14,15.2;vWA:14;THOX:8,11;D18S51:14,21;D5S818:10;FGA:19,23。
同工酶
染色體
使用權限 A類
產品名稱 | 人腦多型膠質母細胞瘤細胞;BT-325培養 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
CM-H071 人腎動脈平滑肌細胞*培養基 100mL
CM-H072 人腎成纖維細胞*培養基 100mL
CM-H073 人膀胱成纖維細胞*培養基 100mL
CM-H084 人臍靜脈平滑肌細胞*培養基 100mL
CM-H085 人臍動脈平滑肌細胞*培養基 100mL
CM-H086 人大隱靜脈平滑肌細胞*培養基 100mL
CM-H087 人冠狀動脈內皮細胞*培養基 100mL
CM-H088 人腹膜毛細血管內皮細胞*培養基 100mL
CM-H089 人髂動脈內皮細胞*培養基 100mL
CM-H090 人血管內皮細胞*培養基 100mL
CM-H091 人大隱靜脈內皮細胞*培養基 100mL
CM-H092 人脈絡膜血管細胞*培養基 100mLC2orf57 2號染色體開放閱讀框57抗體
C2orf29 2號染色體開放閱讀框29抗體
C3orf21 3號染色體開放閱讀框21抗體
C1ORF74 1號染色體開放閱讀框74抗體
C1QTNF10 補體C1q和腫瘤壞死因子相關蛋白10抗體
C1orf94 1號染色體開放閱讀框94抗體
CSNK1D 酪蛋白激酶δ1抗體
CD166 活化白細胞粘附分子抗體
C1orf191 1號染色體開放閱讀框191抗體
Cox A16 polymerase3D 柯薩奇病毒A16型聚合酶3D