產品名稱 | 人結腸癌細胞;CaCo-2培養(yǎng) |
貨期 | 3-5天 |
發(fā)貨地 | 上海 |
細胞名稱 人結腸癌細胞;CaCo-2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系分離自一個原發(fā)性直腸癌。 當細胞長滿時,表現出典型的腸上皮細胞分化特征。表達維甲酸結合蛋白I和維甲酸結合蛋白II,角蛋白陽性。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%FBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 PN3
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11;D13S317:11,14;D16S539:12;D18S51:12;D19S433:15;D21S11:30;D2S1338:17,25;D3S1358:17;D5S818:12,13;D7S820:11,12;D8S1179:12;FGA:19;TH01:6;THOX:9,11;vWA:16,18;D3S1358: 17; TH01: 6; D13S317: 11,14; D16S539: 12; D2S1338: 17, 25; D19S433: 15;
同工酶 無
染色體 88-98
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
CM-H124 人腦微血管內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R002 大鼠肺血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R003 大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R004 大鼠氣管上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R005 大鼠氣管平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R006 大鼠肺成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R007 大鼠支氣管上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R008 大鼠支氣管成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R009 大鼠肺大靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R010 大鼠肺大動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R011 大鼠肺大動脈內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R012 大鼠肺動脈成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R013 大鼠肺大靜脈內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
CM-R014 大鼠氣管和支氣管上皮細胞*培養(yǎng)基 100mLCARD4 凋亡加強結構域蛋白4抗體
C4orf34 4號染色體開放閱讀框34抗體
CKI gamma 3 酪蛋白激酶1γ3/CKI γ3抗體
CARD9 凋亡加強結構域蛋白9抗體
Cholesterol Oxidase *氧化酶抗體
Caspase 14 半胱胺酸蛋白酶蛋白14抗體
Caspase 5 半胱胺酸蛋白酶蛋白5抗體
CSFV 豬瘟病毒抗體
CSFV 豬瘟病毒抗體
Chromogranin C/Sg II 嗜鉻粒蛋白C抗體
CHRNA10 煙堿型乙酰*受體α10/AChRα10抗體
CHRNA6 煙堿型乙酰*受體α6/AChRα6抗體
CHRNA9 煙堿型乙酰*受體α9/AChRα9抗體
CHRND 煙堿型乙酰*受體δ/AChRδ抗體
CARD8 凋亡加強結構域蛋白8抗體