【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱  小鼠纖維肉瘤細(xì)胞；WEHI 164使用說明書
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細(xì)胞系源自3-甲基膽蒽誘導(dǎo)產(chǎn)生的BALB/c小鼠纖維肉瘤，由M. Rollinghoff and N.L. Warneri建立。該細(xì)胞鼠痘病毒陰性。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C170
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  陰性
STR  
同工酶  同工酶鑒定
染色體  
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Lysyl tRNA synthetase    賴氨酸t(yī)RNA的連接酶抗體
Kidins220    220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體
phospho-Kidins220 (Ser918)    磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體
KRV-VP1 + KRV-VP2 (C-terminus)    基爾曼氏細(xì)小病毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在病毒KRV)C端
KCNQ1    鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體
KMT1A    組蛋白H3 K9甲基轉(zhuǎn)移酶抗體
KAT13D    生物鐘KAT13D蛋白抗體
KLHL36    Kelch樣蛋白36抗體
KCC4    鉀氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白KCC4抗體
phospho-KCNA3(Tyr135)    磷酸化離子通道蛋白Kv1.3抗體
KCNE4    鉀離子通道蛋白家族成員4抗體
KCNF1    電壓門控鉀通道蛋白亞基kv5.1抗體
KCNG1    電壓門控鉀通道蛋白亞基kv6.1抗體五味子乙素    Schizandrin B    61281-37-6    400.46    C23H28O6
五味子醇甲    schizandrin    7432-28-2    432.51    C24H32O7
五味子甲素    deoxyschizandrin    61281-38-7    416.51    C24H32O6
五味子酯乙    Schizantherin B    58546-55-7    514.56416    C28H34O9
五味子醇乙    Gomisin A    58546-54-6    416.46    C23H28O7
梭砂貝母酮堿;新貝甲素                
西貝母堿;西貝素;西貝堿    IMPERIALINE    61825-98-7    429.64    C27H43NO3
西貝母堿苷                
酪醇    4-Hydroxyphenethyl alcohol    501-94-0    138.16    C8H10O2
去氫鉤藤堿    Spiro[3H-indole-3,1'(5'H)-indolizine]-7'-aceticacid, 6'-ethenyl-1,2,2',3',6',7',8',8'a-octahydro-a-(methoxymethylene)-2-oxo-, methyl ester, (aE,1'R,6'R,7'S,8'aS)-    630-94-4    382.45284    C22H26N2O4
光萼野百合堿;光萼豬屎豆堿;烏沙拉明    [1,6]Dioxacyclododecino[2,3,4-gh]pyrrolizine-2,7-dione,3-ethylidene-3,4,5,6,9,11,13,14,14a,14b-decahydro-6-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-methyl-,(3E,5R,6S,14aR,14bR)-    15503-87-4    351.3942    C18H25NO6
異去氫鉤藤堿    Isocorynoxeine    51014-29-0    382.45284    C22H26N2O4
哈巴苷    [1S-(1α,4aα,5α,7α,7aα)]-1,4a,5,6,7,7a-hexahydro-4a,5,7-trihydroxy-7-methylcyclopenta[c]pyran-1-yl β-D-glucopyranoside    6926/8/5    364.34506    C15H24O10