【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠雜交瘤細胞;c7b8a5培養(yǎng) |
貨期 | 3-5天 |
發(fā)貨地 | 上海 |
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞;c7b8a5培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性 可產(chǎn)生單克隆抗體。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
復(fù)蘇操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
山羊血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)免疫試劑盒 Goat angiotensin-converting enzyme,ACE ELISA kit
山羊熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒 Goat Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA KIT
山羊醛固酮(ALD)免疫試劑盒 Goat aldosterone,ALD ELISA Kit
山羊前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1(前列腺素G / H合酶和環(huán)氧合酶)(PTGS1)免疫試劑盒 Goat PTGS1 ELISA kit
山羊前列腺素G/H合酶2(PTGS2)免疫試劑盒 Goat Prostaglandin G/H synthase 2,PTGS2 ELISA kit
山羊前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒 Goat prostaglandin E2,PGE2 ELISA kit
山羊*(Cortisol)免疫試劑盒 Goat Cortisol ELISA Kit
山羊腦啡肽(ENK)免疫試劑盒 Goat enkephalin,ENK ELISA KitCBZ-L-苯* shēng huà shì jì 容量: 25克
CBZ-D-* shēng huà shì jì 容量: 1公斤
CBZ-D-天冬氨酸 shēng huà shì jì 容量: RT 5克
CBZ-D-* shēng huà shì jì 容量: 25克
CBZ-D-* shēng huà shì jì 容量: 25克
CBZ-D-* shēng huà shì jì 容量: 25克
CBZ-D-* shēng huà shì jì 容量: 5克
CBZ-D-苯* shēng huà shì jì 容量: RT,避光 5克
CBZ-DL-苯* shēng huà shì jì 容量: 25克
BOC-L-異* shēng huà shì jì 容量: RT 10克