產(chǎn)品名稱 | 大鼠纖維母細(xì)胞;1/EJ 1-1培養(yǎng) |
貨期 | 3-5天 |
發(fā)貨地 | 上海 |
細(xì)胞名稱 大鼠纖維母細(xì)胞;1/EJ 1-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 多形細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C10
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
復(fù)蘇操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
碘化丁酰硫代*(-20℃) S-BUTYRYLTHIOCHOLINE IODIDE 1866-16-6
NESSLER'S REAGENT 7783-33-7
碘化鋰 LITHIUM IODIDE 10377-51-2
碘化乙酰硫代*(+4℃) ACETYLTHIOCHOLINE IODIDE 1866-15-5
碘化鉛 Lead(II) iodide 10101-63-0
THALLIUM(I) IODIDE 7790-30-9
碘化亞銅 Cuprous iodide 7681-65-4
碘化乙酰* (-20℃) NA
碘甲基甲醚 IODOMETHYL METHYL ETHER 13057-19-7人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因4(TIMP-4)免疫試劑盒 Human TIMP-4 ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因3(TIMP-3)免疫試劑盒 Human TIMP-3 ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因2(TIMP-2)免疫試劑盒 Human TIMP-2 ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)免疫試劑盒 Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)免疫試劑盒 Human Matrix metalloproteinase 8/Neutrophil collagenase,MMP-8 ELISA kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)免疫試劑盒 Human Matrix metalloproteinase 7,MMP-7 ELISA kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)免疫試劑盒 Human matrix metalloproteinase 5,MMP-5 ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)免疫試劑盒 Human matrix metalloproteinase 4,MMP-4 ELISA Kit