【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱  豚鼠胚胎細(xì)胞；104C1培養(yǎng)
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性  貼壁生長(zhǎng)
特征特性   104C1細(xì)胞初期源于2/N株豚鼠的胎組織，后來細(xì)胞群體用苯并芘(Benzopyrene)處理7天誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生惡性轉(zhuǎn)化，連續(xù)克隆后獲得傳代細(xì)胞系。細(xì)胞染色體保留2倍體特征，但接種豚鼠產(chǎn)生實(shí)體腫瘤。 
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C32
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  陰性
STR   STR鑒定
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
三氯化銦    Indium chloride    10025-82-8
2,2,2-三氯乙基氯甲酸酯    2,2,2-Trichloroethyl chloroformate    17341-93-4
氯甲酸-4-硝基芐酯    4-Nitrobenzyl chloroformate    4457-32-3
氯甲酸芐酯    Benzyl chloroformate    501-53-1
氯甲酸異丙酯(約30％的,約2mol/L)（+4℃）    Isopropyl chloroformate    108-23-6
氯甲酸正丙酯    Propyl chloroformate    109-61-5
氯酸鈉;氯酸堿;氯酸曹達(dá);白藥鈉    SodiuM chlorate    7775/9/9
*    BenzalkoniuM Chloride    8001-54-5
氯亞鉑酸鉀    dipotassium tetrachloroplatinate    10025-99-7
氯亞釕酸銨    AMMONIUM AQUOPENTACHLORORUTHENATE(III)    68133-88-0
氯亞銥酸銨    AMMONIUM HEXACHLOROIRIDATE (III) HYDRATE    29796-57-4
氯乙基異氰酸酯    2-Chloroethyl isocyanate    1943-83-5
乙酰氯 ≥99.0％ (T）    Acetyl chloride    75-36-5人八聚體轉(zhuǎn)錄因(OTF2B)免疫試劑盒    Human octamer transcription factor 2B,OTF2B ELISA Kit
人八聚體轉(zhuǎn)錄因(OTF2A)免疫試劑盒    Human octamer transcription factor 2A,OTF2A ELISA Kit
人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)免疫試劑盒    human EchoVirus IgM,ECHO IgM ELISA Kit
人艾柯病毒IgG(ECHO IgG)免疫試劑盒    Human EchoVirus IgG,ECHO IgG ELISA Kit
人艾杜糖硫酸酯酶(IDS)免疫試劑盒    Human iduronate sulfatase,IDS ELISA Kit
人癌癥促凝素(CP)免疫試劑盒    Human Cancer Procoagulant,CP ELISA Kit
人癌抗原27-29(CA 27-29)免疫試劑盒    Human cancer antigen 27-29,CA 27-29 ELISA Kit