【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產品名稱：小鼠關節軟骨細胞操作步驟

2.組織來源：關節軟骨組織

3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

小鼠關節軟骨細胞分離自關節軟骨組織；關節軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結締組織的膠原纖維構成的基本框架，這種框架呈半環形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質上，上端朝向關節面，這種結構使關節軟骨緊緊與骨結合起來而不會掉下來，同時當受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關節軟骨的正常代謝。關節軟骨沒有神經支配，也沒有血管，其營養成分必須從關節液中取得，而其代謝廢物也必須排至關節液中，關節軟骨的這種營養代謝必須通過關節運動，使關節軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關節運動對于維持關節軟骨的正常結構起重要的作用。關節軟骨細胞位于關節軟骨陷窩內。幼稚的關節軟骨細胞位于關節軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關節軟骨表面平行，越向深層的關節軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的關節軟骨細胞多2-8個成群分布于關節軟骨陷窩內，這些關節軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，關節軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的關節軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

本公司的小鼠關節軟骨細胞采用膠原酶聯合*消化制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5.培養基信息：

DMEM-F12、FBS、軟骨細胞生長添加劑、Vitamin Supplements、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
大鼠細胞間粘附分子3 
大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1 
人抗BB抗體 
小鼠* 
人抗平滑肌抗體 
小鼠促甲狀腺素 
大鼠纖溶酶原激活物抑制因子 
小鼠甲基化酶 
人抗肝細胞膜抗體 
大鼠血纖蛋白原降解產物 
小鼠抗增殖細胞核抗原抗體 
大鼠血栓調節蛋白 
人抗肝特異性脂蛋白抗體 
人抗眼肌抗體 
大鼠血小板衍生生長因子 
小鼠脂蛋白脂酶 
小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b 
大鼠氧化低密度脂蛋白 
人抗補體1q抗體 
人抗內因子抗體 
小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽 
大鼠血小板活化因子 
大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽 
小鼠糖原磷酸化酶同工酶II 
人抗磷脂抗體 
小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM 
大鼠Ⅲ型膠原 
人抗組蛋白抗體 
抗髓鞘少樹突膠質細胞糖蛋白(人) 
人晶體蛋白α 
大鼠C反應蛋白 
小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB 
大鼠組織多肽抗原 
小鼠甲狀腺素抗體 
人晶體蛋白β 
人抗膠原蛋白抗體 
大鼠組織型纖溶酶原激活劑 
小鼠抗促甲狀腺素受體抗體 
兔抗人、大、小鼠磷酸化Bcl-2抗體IgG   0.2ml
Anti-Phospho-Bcl-2 (p-Ser70) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化Bcl-2抗體IgG   0.2ml
Anti-Bcl-6/Bcl-5/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠原癌基因Bcl-6抗體IgG   0.2ml
Anti-Bcl-10/CLAP/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠Bcl-10抗體IgG   0.2ml
Anti-Bcl-10(phospho Ser218)/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化Bcl-10抗體IgG   0.2ml
Anti-Bcr/CD3D/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠T淋巴細胞受體抗體IgG   0.2ml
Anti-Phospho-Bcr(p-Tyr177)/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化T淋巴細胞受體抗體IgG   0.2ml
Anti-BCRP/ABCG2/BXP-21 /FITC  熒光素標記三磷酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員2抗體IgG   0.2ml
Anti-Bdkrb2/B2R/FITC  熒光素標記緩激肽B2受體抗體IgG   0.2ml
Anti-BDNF/FITC  熒光素標記BDNF蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-BECN1/FITC  熒光素標記一種抑癌基因抗體IgG   0.2ml
Anti-EpCAM/CD326/FITC  熒光素標記上皮細胞特異性EpCAM/CD326蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-Beta-casein( Beta-casein)/FITC  熒光素標記 β-酪蛋白(抗體)IgG   0.2ml
Anti-BFGF/FITC  熒光素標記堿性成纖維細胞生長因子抗體IgG   0.2ml
Anti-BGP/FITC  熒光素標記骨保護蛋白/骨鈣素抗體IgG   0.2ml
Anti-Bid/FITC  熒光素標記BH3結構域凋亡誘導蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-AQP-2/HRP (aquaporin Protein-2)  辣根過氧化物酶標記水通道蛋白-2抗體IgG   0.2ml
Anti-BIN1/FITC  熒光素標記橋連整合因子蛋白抗體