【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產品名稱：兔肌腱干細胞操作步驟

2.組織來源：肌腱組織

3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

兔肌腱干細胞分離自肌腱組織；肌腱是肌腹兩端的索狀或膜狀致密結締組織，便于肌肉附著和固定。一塊肌肉的肌腱分附在兩塊或兩塊以上的不同骨上，是由于肌腱的牽引作用才能使肌肉的收縮帶動不同骨的運動。每一塊骨骼肌都分成肌腹和肌腱兩部分，肌腹由肌纖維構成，色紅質軟，有收縮能力，肌腱由致密結締組織構成，色乳白較硬，沒有收縮能力。肌腱把骨骼肌附著于骨骼。長肌的肌腱多呈圓索狀，闊肌的肌腱闊而薄，呈膜狀，又叫腱膜。此處的肌腹即為通常所說的紅肌，而肌腱即為白肌，分別控制肌肉的力量、爆發力和耐力。肌腱干細胞（TSCs）是一種來源于肌腱組織的間充質干細胞，其具有多向分化潛能，并且在外源性前列腺素E2作用下異常分化。體外培養時該細胞群具有克隆形成能力、自我更新及多向分化潛能等干細胞的普遍特性。肌腱干細胞可以被誘導向脂肪細胞、軟骨樣細胞、骨細胞分化；在裸鼠模型中，肌腱干細胞還可以形成肌腱樣組織，軟骨樣組織以及腱-骨連接樣組織等。相比骨髓間充質干細胞而言，TSCs具有更好的克隆形成能力和增殖能力，軟骨相關基因和肌腱相關基因表達更高，具有更好的成骨、成脂和成軟骨能力，因此可以作為組織工程中的種子細胞。

本公司的兔肌腱干細胞采用膠原酶、*混合消化法并通過肌腱干細胞培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經CD90/CD44、CD34/CD45免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5.培養基信息：

DMEM-F12、FBS、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
Cy3標記的兔抗羊IgM Inhibin Alpha
Cy5標記的兔抗羊IgM Inhibin beta A peptide
Cy5.5標記的兔抗羊IgM Inhibin beta B
Cy7標記的兔抗羊IgM Integrin Alpha3
PE標記的兔抗羊IgM Integrin Beta5
*標記的兔抗羊IgM Integrin alpha 1
辣根過氧化物酶標記的兔抗羊IgM Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7)
辣根過氧化物酶標記的兔抗豚鼠IgG Integrin AlphaE2/CD103
膠體金標記的兔抗豚鼠IgG ENPP3/CD203c(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase 3)
*標記的兔抗豚鼠IgG IQGAP1
Cy3標記的兔抗豚鼠IgG IRF-1(Interferon regulatory factor-1)
Cy5標記的兔抗豚鼠IgG IRAK 2
Cy5.5標記的兔抗豚鼠IgG IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist)peptide
Cy7標記的兔抗豚鼠IgG Integrin a7(integrin alpha 7)
PE標記的兔抗豚鼠IgG integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29)
PE-Cy3標記的兔抗豚鼠IgG Integrin Alpha5(ITG- AlphaV/CD49e)
PE-CY5標記的兔抗豚鼠IgG Integrin alpha V/CD51 peptide
APC標記的兔抗豚鼠IgG JAK1(Tyrosine-protein kinase JAK1; Janus kinase 1)
Alexa Fluor 350標記的兔抗豚鼠IgG JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2; Janus kinase 2; JAK-2)
Alexa Fluor 488標記的兔抗豚鼠IgG phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008)
堿性磷酸酶（AP）標記的兔抗豚鼠IgG JNK1/3 (c-Jun amino-terminal kinase 1/3)
FITC標記的兔抗豚鼠IgG phospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) peptide
Alexa Fluor 555標記的兔抗豚鼠IgG Ki-67(Antigen identified by monoclonal antibody Ki
REG-4(Human regenerating gene IV ) ELISA Kit  人再生基因蛋白IV   48T
VS(Human versican/PG-M/PG-350) ELISA kit  人多功能蛋白聚糖   48T
Nfkbie(Human nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor epsilon) KLISA Kit  人B細胞κ 輕肽基因增強子核因子抑制因子ε   48T
ADAMTS4(Human ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4) ELISA Kit  人ADAM金屬肽酶含血小板反應蛋白1基元4   48T
Human similar to RIKEN cDNA 4933429F08 gene ELISA Kit  人類似RIKEN cDNA 4933429F08 基因   48T
PAQR7(Human progestin and adipoQ receptor family member VII ) ELISA Kit  人孕酮和adipoQ受體家族成員Ⅶ   48T
COLEC11(Human collectin sub-family member 11) ELISA Kit  人集蛋白亞家族成員11   48T
Serpina3g(Human serine/cysteine peptidase inhibitor clade A member 3G) ELISA Kit  人*蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G   48T
Human similar to RIKEN cDNA A630077B13 gene ELISA Kit  人類似RIKEN cDNA A630077B13 基因   48T
Human similar to RIKEN cDNA 3110050K21 gene ELISA Kit  人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因   48T
Human similar to RIKEN cDNA 2610307008 gene ELISA Kit  人類似RIKEN cDNA 2610307008 基因   48T
human similar to RIKEN cDNA 2010109K09 gene ELISA KIT  人類似RIKEN cDNA 2010109K09 基因   48T
RHOB(Human ras homolog gene family,memmber B) ELISA Kit  人ras同源物基因家族成員b   48T