【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產品名稱：兔肌源性干細胞操作步驟

2.組織來源：肌肉組織

3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

兔肌源性干細胞分離自肌肉組織；肌源性干細胞（MDSCs）屬于成體多能干細胞，具有多細胞系分化和自我更新能力。通過誘導刺激，MDSCs可以分化為脂肪、骨骼、軟骨、平滑肌和神經細胞等多種細胞和組織類型；作為基因治療和組織工程的供體細胞，已成為治療心肌梗死、Duchenne氏肌營養不良等疾病的研究熱點；近年來，肌源性干細胞在治療尿失禁等方面的應用逐步得到重視。需注意的是，肌源性干細胞主要存在于骨骼肌組織中，只是成熟組織的很少部分細胞；平時處于靜止狀態，在細胞應激和組織缺失時才會激活；并且隨著年齡的增加，所含細胞數量逐漸減少，而目前臨床疾病的治療主要是針對成體進行。肌源性干細胞的體外擴增對細胞移植和干細胞介導的基因治療至關重要。對肌源性干細胞的擴增研究發現，EGF、FGF-2和SCF可以通過減數分裂或促使不分裂細胞進入有絲分裂周期，從而刺激細胞增生。更重要的是，細胞因子誘導的體外擴增可以通過自我更新不刺激細胞分化，從而保持干細胞表型。

本公司的兔肌源性干細胞采用膠原酶-*-*聯合消化法結合密度梯度離心、差速貼壁法，zui后通過肌源性干細胞培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經CD34、Desmin、CD45免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5.培養基信息：

DMEM[H]、FBS、HS、Chicken Embryo Extract(CEE)、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
(Cyclin Dependent Kinase 6)
Alexa Fluor 555標記的小鼠抗人IgG CDK7/Cyclin H/MAT1
PE-Cy3標記的小鼠抗人IgG CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8)
PE-CY5標記的小鼠抗人IgG Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C)
APC標記的小鼠抗人IgG CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 )
Cy3標記的小鼠抗人IgG Cecropin
Cy5標記的小鼠抗人IgG HER2 receptor(erbB-2 isoform 2)
Cy5.5標記的小鼠抗人IgG C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4)
Cy7標記的小鼠抗人IgG CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)
羅丹明標記的小鼠抗人IgM CG6856-PA peptide
*標記的小鼠抗人IgM CGA(Chromogranin A)
辣根過氧化物酶標記的小鼠抗人IgM CGB(Chromogranin B)
FITC標記的小鼠抗人IgM ChRM1(muscarinic acetylcholine receptor)
Cy3標記的小鼠抗人IgM ChRM3 peptide
Cy5標記的小鼠抗人IgM CK18(Cytokeratin 18)
Cy5.5標記的小鼠抗人IgM CK18 peptide
PE-Cy3標記的小鼠抗人IgM CK18(Cytokeratin 18)
PE-CY5標記的小鼠抗人IgM CK14/17/42/10 peptide
APC標記的小鼠抗人IgM CK16(Cytokeratin 16)
Alexa Fluor 350標記的小鼠抗人IgM CK17(Cytokeratin 17)
Alexa Fluor 488標記的小鼠抗人IgM CK1/8/19 (Cytokeratin1/8/19; Keratin 1/8/19)peptide
Alexa Fluor 555標記的小鼠抗人IgM CK2(casein kinase 2)
Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgM CK5(Cytokeratin 5)
PE-Cy5.5標記的小鼠抗人IgM CK7(Cytokeratin 7)human
PE-Cy7標記的小鼠抗人IgM CK8(Cytokeratin 8)
堿性磷酸酶（AP）標記的小鼠抗人IgM CKIP-1(casein kinase 2 interaction protein 1)
膠體金標記的小鼠抗人IgM CLCA4(Calcium-activated chloride channel 4)
Cy7標記的小鼠抗人IgM C-Mer/MERTK (proto-oncogene tyrosine kinase)
PE標記的小鼠抗人IgM c-Myc tag
羅丹明標記的小鼠抗羊IgG AU5 tag
Human Collagenase Type II ELISA Kit  人膠原酶II   48T
Human Collagenase I ELISA Kit  人膠原酶I   48T
P-PKC(Human phospho Protein Kinase C) ELISA Kit  人磷酸化蛋白激酶C   48T
pERK(Human phospho-extracellular signal-regulated kinase) ELISA Kit  人磷酸化細胞外信號調節激酶   48T
AChE(Human Acetylcholinesterase) ELISA Kit  人乙酰*酯酶   48T
GOD(Human glucose oxidase) ELISA Kit  人葡萄糖氧化酶   48T
TH(Human tyrosine hydroxylase) ELISA Kit  人*羥化酶   48T
DDC(Human dopamine decarboxylase) ELISA Kit  人多巴胺脫羧酶   48T
NNE(Human non-neuronal enolase) ELISA Kit  人非神經元性烯醇化酶   48T
DBH(Human dopamine- Beta-hydroxylase) ELISA Kit  人多巴胺-β羥化酶   48T
CHAc(Human choline acetylase) ELISA Kit  人*乙酰化酶   48T
ICD(Human isocitrate dehydrogenase) ELISA Kit  人異檸檬酸脫氫酶   48T
Try- II (Human Trypsinogen-2) ELISA Kit  人*原Ⅱ   48T
ADA(Human adenosine deaminase) ELISA Kit  人腺苷脫氨酶   48T
HAase(Human Hyaluronidase) ELISA Kit  人透明質酸酶   48T
AST(Human Aspartate aminotransferase) ELISA Kit  人天*氨基轉移酶   48T
ACP(Human Acid Phosphatase) ELISA Kit  人酸性磷酸酶   48T
GPI(Human glucose-6-phosphate isomerase) ELISA Kit  人葡萄糖6磷酸異構酶   48T
PGM(Human Phosphoglucomutase) ELISA Kit  人磷酸葡萄糖變位酶   48T