【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產(chǎn)品名稱：兔椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞操作步驟

2.組織來源：椎間盤組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

兔椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個(gè)密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚，而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強(qiáng)大的前縱韌帶，后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細(xì)胞密度為9000個(gè)細(xì)胞/mm3，其外層的細(xì)胞呈梭型，主要屬于纖維細(xì)胞，內(nèi)層細(xì)胞呈圓形，主要屬于軟骨細(xì)胞。在培養(yǎng)的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，它們的核較圓，核仁較明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒，纖維環(huán)細(xì)胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少，纖維環(huán)的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。

本公司的兔椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞采用膠原酶-*聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白、Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

DMEM-F12、FBS、軟骨細(xì)胞生長添加劑、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時(shí)限至一個(gè)月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過一個(gè)月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
metalloproteinase-3/Transin-1/SL-1/Stromelysin-1 precursor)
羅丹明標(biāo)記的羊抗小鼠IgG MMP-7(Matrilysin/matrix metalloproteinases-7)
羅丹明標(biāo)記的羊抗兔IgG MMP-14(Matrix metalloproteinase-14)
FITC標(biāo)記的驢抗羊IgG GFRAlpha-1(GDNF family receptor alpha-1)
FITC標(biāo)記的小鼠抗羊IgG Ang- II (Angiotensin II )
辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgG GLUT2(Glucose transporter type 2)
辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗羊IgG ANP(atrial natriuretic peptide)
Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗羊IgM GFRA4 ( Persephin receptor ) (GFR receptor alpha 4)
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgM GHRF (GHRH)
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgM ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1)
PE-Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG GLUT4(Glucose transporter type 4)
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM GIP (Gastric Inhibitory polypeptide)
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM ANGPTL2/ANG-2 (Angiopoietin-like Protein 2)
PE-Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgM GLP-2(Glucagon-like peptide-2)
PE-CY5標(biāo)記的兔抗羊IgM GRP94 (gp96)
辣根過氧化物酶標(biāo)記的驢抗羊IgG Annexin A
辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗羊IgG G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein)
羅丹明標(biāo)記的羊抗大鼠IgG GR (Glucocorticoid receptor)
Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG Annexin II
PE標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG CKR-L2( G protein-coupled receptor-2 )
PE-Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG GTP-CH-1
Cy5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2)
antibody) ELISA Kit  人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體   48T
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit  人雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2   48T
BV(Human bacterial vaginosis) ELISA Kit  人細(xì)菌病   48T
HSV I Ab(Human Herpes simplexvirus I antibody) ELISA Kit  人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體   48T
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit  人雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2   48T
HPV-IgM(Human papillomavirus IgM) ELISA Kit  人狀瘤病毒抗體IgM   48T
HPV-IgG(Human papillomavirus IgG) ELISA Kit  人狀瘤病毒抗體IgG   48T
HSV-Ag2(Human Herpes simplex virus 2) ELISA Kit  人單純皰疹病毒抗原2   48T
fPSA(Human Free Prostate Specific Antigen) ELISA Kit  人游離前列腺特異性抗原   48T
PSA(Human prostate specific antigen) ELISA Kit  人前列腺特異性抗原   48T
PS(Human phosphatidylserine) ELISA Kit  人磷脂酰*   48T
PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit  人*磷酸甘油酯   48T
TBA(Human Total bile acide) ELISA Kit  人總膽汁酸   48T
Apo C3(Human Apolipoprotein C3) ELISA Kit  人載脂蛋白C3   48T
CH(Human cholesterol) ELISA Kit  人血清總*   48T
MT2(Human Metallothionein 2) ELISA Kit  人金屬硫蛋白2   48T
sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1) ELISA Kit  人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1   48T
3-NT(Human 3-Nitrotyrosine) ELISA Kit  人3-硝基*   48T
GAG(Human glycosaminoglycan) ELISA Kit  人糖胺聚糖   48T
CysLTs(Human cysteinyl leukotrienes) ELISA Kit  人半胱氨酰白三烯   48T
CALU(Human calumenin) ELISA Kit  人鈣腔蛋白   48T