今天為大家講述晶抗生物牛ELISA試劑盒的基本操作步驟如下

準備工作：

試劑準備：從冷藏環境中取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘左右，讓試劑恢復到室溫。同時按照說明書的要求準備好各種試劑，如洗滌液可能需要進行稀釋等。

樣本準備：采集的牛血清、血漿或其他相關液體樣本，按照規定的方法進行處理和保存。例如，血清樣本可于室溫放置 2 小時或 4℃過夜后于 1000xg 離心 20 分鐘，取上清液用于檢測；血漿樣本可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標本采集后 30 分鐘內于 2-8℃、1000xg 離心 15 分鐘，取上清液備用。

加樣：

分組：取出 96 孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組（一般有 6 個濃度梯度）、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）、待測樣品組。為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

加樣操作：依照標準品的順序分別加入適量的標準品溶液于空白微孔中，空白對照孔加入等量的蒸餾水或相應的空白對照液，其余微孔中加入處理好的待測樣本。加樣時應將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

溫育：

用封板膜封板后，將酶標板放入濕盒內，根據試劑盒說明書的要求在特定溫度（通常為 37℃）下恒溫孵育一定的時間（一般為 1 小時左右，但不同的試劑盒可能有不同的要求）。在溫育過程中，要確保溫度的準確性和穩定性，避免溫度波動對實驗結果造成影響。

洗滌：

小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干。每孔加滿洗滌液，靜置 15-30 秒后棄去，如此重復多次（一般為 5 次），最后用吸水紙拍干。洗滌過程要充分，以確保去除未結合的物質，避免對后續的檢測產生干擾，但也要注意避免過度洗滌導致樣本損失。

加酶標溶液：

除空白對照孔外，向標準品組和待測樣本組的各孔中加入適量的酶標溶液。加酶標溶液時要注意操作的準確性，避免加樣誤差。

再次溫育：同第 3 步的溫育操作，再次進行溫育，使酶標溶液與樣品充分反應。

顯色：

各孔加入顯色劑 A 液，再加入顯色劑 B 液，輕輕震蕩混勻。然后在特定溫度（如 25-37℃）下避光反應一定時間（一般為 10-15 分鐘），此時孔內的顏色會發生變化。

終止反應：

加入終止液，終止反應（此時顏色通常會由藍色立轉黃色）。終止液的加入量要準確，并且要迅速、均勻地加入，以確保反應能夠及時終止。

讀板：使用酶標儀在特定波長（一般為 450nm）下讀取各孔的吸光度（OD 值）。

結果分析：根據標準品的 OD 值繪制標準曲線，然后根據待測樣品的 OD 值在標準曲線上查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數（如果在加樣前對樣品進行了稀釋），即為樣品的實際濃度。

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