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當(dāng)前位置:上海士鋒生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)
一、體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化
1、差異:細(xì)胞離體后,失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響,生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡的相對(duì)穩(wěn)定環(huán)境中,久天長(zhǎng),易發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象減弱;形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡;或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性,變成可無限生長(zhǎng)的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此,培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體,它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能,也有一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實(shí)際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后,這種差異就開始發(fā)生了。
雖然體外細(xì)胞與機(jī)體細(xì)胞存有差異,但并未失去研究的意義。且不論其有許多性狀仍與體內(nèi)相同(如體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞仍可博動(dòng)),只從細(xì)胞遺傳學(xué)(Cyto-genetics)的角度看,離體細(xì)胞仍帶有全套的二倍體基因。細(xì)胞在培養(yǎng)中的表現(xiàn),只不過是相應(yīng)基因關(guān)閉/開啟引起的現(xiàn)象,這并非是缺陷。恰恰相反,在培養(yǎng)的細(xì)胞中某些特定功能的喪失,可為該基因的表達(dá)與調(diào)控提供線索。
2、分化;體外培養(yǎng)的細(xì)胞分化能力并未*喪失,只是環(huán)境的*,細(xì)胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細(xì)胞是否表現(xiàn)分化關(guān)鍵在于是否存在使細(xì)胞分化的條件,如Friend細(xì)胞(小鼠紅白血病細(xì)胞)在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白,血管內(nèi)皮細(xì)胞在類似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時(shí)能長(zhǎng)成血管狀結(jié)構(gòu),雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體,這些均屬于細(xì)胞分化行為。
二、體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型
(一)貼附型:大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng),屬于貼壁依賴性細(xì)胞,判斷細(xì)胞形態(tài)時(shí)不能接體內(nèi)組織學(xué)標(biāo)推判定,僅大致分成以下四型:
1、成纖維細(xì)胞型:胞體呈梭型或不規(guī)則三角形,中央有卵圓形核,胞質(zhì)突起,生長(zhǎng)時(shí)呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外,凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織,如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。另外,凡培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類似時(shí)皆可稱之為成纖維細(xì)胞。
2、上皮型細(xì)胞:細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形,中央有圓形核,細(xì)胞彼此緊密相連成單層膜。生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng),處于膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連,很少單獨(dú)行動(dòng)。起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài)。
3、游走細(xì)胞型:呈散在生長(zhǎng),一般不連成片,胞質(zhì)常突起,呈活躍游走或變形運(yùn)動(dòng),方向不規(guī)則。此型細(xì)胞不穩(wěn)定,有時(shí)難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。
4、多型細(xì)胞型:有一些細(xì)胞,如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài),可統(tǒng)歸于此類。
(二)懸浮型;見于少數(shù)特殊的細(xì)胞,如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形,不貼于支持物上,呈懸浮生長(zhǎng)。這類細(xì)胞容易大量繁殖。
三、培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過程
體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)在動(dòng)態(tài)平衡環(huán)境中,而組織培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、皿或其它容器,生存空間和營(yíng)養(yǎng)是有限的。當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后,則需要分離出一部分細(xì)胞和更新營(yíng)養(yǎng)液,否則將影響細(xì)胞的繼續(xù)生存,這一過程叫傳代(Passage或Subculture)。每次傳代以后,細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過程都會(huì)受一定的影響。另外,很多細(xì)胞特別是正常細(xì)胞,在體外的生存也不是無限的,存在著一個(gè)發(fā)展過程。所有這一切,使組織細(xì)胞在培養(yǎng)中有著一系列與體內(nèi)不同的生存特點(diǎn)。
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