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基本原理
分泌抗體的激活b細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,才能生成具有親體細(xì)胞兩方面特性即既可產(chǎn)生抗體又可在體外無(wú)限繁殖的雜交瘤細(xì)胞,因此,細(xì)胞融合是單克隆抗體制備的中心環(huán)節(jié)。細(xì)胞融合的方法多采用化學(xué)助融法,zui常用的化學(xué)助融劑為聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG),分子量100-4000的PEG助融效果,對(duì)細(xì)胞的毒性相對(duì)小。此外,還可利用電融合等物理方法,在親本細(xì)胞的情況西很有適宜采用。本節(jié)介紹化學(xué)融合方法。抗體分泌細(xì)胞是由免疫動(dòng)物(小鼠或大鼠)的脾臟或淋巴結(jié)制備,與骨髓瘤細(xì)胞混合,并用PEG使之融合。5-15天后,僅雜交瘤開(kāi)始在選擇培養(yǎng)基(見(jiàn)前)中生長(zhǎng)。其后測(cè)定雜交瘤分泌的特異抗體,一旦選出合用的陽(yáng)性細(xì)胞,則進(jìn)行克隆,亞克隆及凍存。
通過(guò)細(xì)胞融合得到B細(xì)胞雜交瘤實(shí)驗(yàn)
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