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目的要求
通過PAS反應,了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細胞中的分布。
基本原理
糖原由D-葡萄糖的分支或直鏈組成,在肝和肌肉zui豐富。過碘酸是一種強氧化劑,能將葡萄糖中乙二醇基(CHOH-CHOH)氧化成二個游離醛基(—CHO),游離醛基與Schiff ‘s試劑反應生成紫紅色產物,顏色深淺與多糖含量成正比。
由于單糖在固定、脫水和包埋等組織化學操作過程中被抽提掉,故一般組織標本上所能顯示的糖類主要是多糖,包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要確定此紅色物質是否糖原還需要同時進行對照實驗。糖原可被唾液淀粉酶水解,先用唾液淀粉酶作用再進行PAS顯色,若反應為陰性,則表明是糖原,反之則為其他多糖。
實驗用品
1.器材:石蠟切片機,蓋玻片、載玻片、染色缸等.
2.試劑
0.5%過碘酸溶液;Schiff‘s試劑
3.材料:小鼠肝石蠟切片
切片經二甲苯和各級酒精復水后,入0.5%的過碘酸溶液中作用15分鐘,取出后水洗。
糖原的顯示—PAS反應(periodic acid schiff’s reaction)
切片充分洗凈后入Schiff‘s試劑中進行顯色。作用15分鐘左右,將切片取出水洗,為洗去非特異性著色,將切處理品入三級新配制的亞硫酸中進行沖洗,取出后水洗,鏡檢。
糖原的顯示—PAS反應(periodic acid schiff’s reaction)
對照片的設置
為了確保實驗結果的可信性,在實驗中需設置陰性對照片。
對照片在復水后,用唾液淀粉酶37℃水解30—60分鐘,取出后水洗,再入過碘酸處理。
實驗結果
糖原的顯示—PAS反應(periodic acid schiff’s reaction)
實驗報告
繪圖表示糖元在細胞中的分布情況;
在實驗過程中,過碘酸處理能起到什么作用,它和Feulgen反應中Hcl的作用有何異同?
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