細(xì)菌個(gè)體微小，普通光學(xué)顯微鏡下不易直接觀察，故常用染色技術(shù)使細(xì)菌細(xì)胞著色。包括細(xì)菌單染技術(shù)、細(xì)菌的革蘭氏染色技術(shù)、細(xì)菌的芽孢染色技術(shù)、細(xì)菌的莢膜染色技術(shù)和細(xì)菌的鞭毛染色技術(shù)

Ⅰ、細(xì)菌的單染技術(shù)
簡(jiǎn)單染色通常只用一種染色劑，使細(xì)菌整個(gè)細(xì)胞染上顏色。但看不清結(jié)構(gòu)。所以只便于檢查細(xì)菌的形態(tài)、大小和排列方式等。
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br />1、掌握單染色的操作技術(shù)
2、觀察細(xì)菌的基本形態(tài)
【實(shí)驗(yàn)原理】
單染色即用單純的種染料進(jìn)行染色，多數(shù)采用美藍(lán)、結(jié)晶紫或石碳酸復(fù)紅等堿性染料。此法僅能顯示細(xì)胞的外部形態(tài)，而不能辨別其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。染色前必須將細(xì)胞固定，其目的是殺死細(xì)菌，并使它粘附在載玻片上。此外，還可以增加菌體對(duì)染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。無(wú)論用哪種方法都應(yīng)盡量使細(xì)菌維持原有的形態(tài)，防止細(xì)胞膨脹或收縮。
【實(shí)驗(yàn)材料、藥品及器具】
1、菌種 大腸桿菌（Escherichia coli）
枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）
2、染色液 石炭酸品紅染色或結(jié)晶紫染色液（Stining Solutions）
3、無(wú)菌水
4、洗瓶裝蒸餾水
5、洗凈的載玻片（Slicle）5片
6、顯微鏡、香柏油、接種環(huán)、酒精燈、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1、涂片：取一片干凈無(wú)油載玻片，在其中央滴一滴無(wú)菌水，然后用接種環(huán)以無(wú)菌操作方法取少許培養(yǎng)好的大腸桿菌，放在載玻片的水滴中涂勻，注意菌量不宜過(guò)多，否則，不易看清單個(gè)菌體。
2、固定：將涂好的玻片在空氣中風(fēng)干或火焰上通過(guò)3～4 次，使水份蒸發(fā)，此時(shí)細(xì)菌菌體緊貼在玻片上。
3、染色：用石炭酸品紅或結(jié)晶紫染色劑30~60S，然后用洗瓶輕輕沖洗染色劑（注意不要直接沖洗染色部位），直至無(wú)多余的染液，晾干或用吸水紙從旁吸干或用微火烘干。
4、用同樣方法將枯草芽孢桿菌制作一張涂片。
5、鏡檢：首先在低倍鏡下找到物像，然后在涂膜中央滴一滴香柏油，換成油浸鏡觀察兩個(gè)菌種的形態(tài)和排列。
6、去除油鏡上的香柏油：先用干凈的擦鏡紙擦2-3 次，再換另一張擦鏡紙蘸取少許二甲苯以除去殘留的香柏油，zui后用擦鏡紙擦干。擦鏡頭時(shí)應(yīng)順著鏡頭直徑方向擦，不要沿著圓周方向擦。
【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
1、繪制觀察到大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的形態(tài)圖，并注明放大倍數(shù)。
2、用文字描述兩菌株的細(xì)胞形態(tài)。
【思考題】
1、涂片在染色前為什么要*行固定？固定時(shí)應(yīng)注意什么問(wèn)題？
2、制片為什么要*干燥后才能用油鏡觀察？
3、制片時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？為什么？
Ⅱ、細(xì)菌的革蘭氏染色
革蘭氏染色是細(xì)菌鑒定上一個(gè)zui重要和廣泛應(yīng)用的方法。根據(jù)此法染色結(jié)果可將細(xì)菌分成兩大類(lèi)。一類(lèi)細(xì)菌能夠保留初染色劑（結(jié)晶等）于細(xì)胞中，不受脫色劑（酒精）的影響，而zui后細(xì)菌被染成紫色或深藍(lán)色者稱(chēng)為革蘭氏陽(yáng)性（Gram-positive）；另一類(lèi)細(xì)菌可因脫色劑的作用而洗出結(jié)晶紫，然后被另一染色劑（藏紅花）染成紅色，稱(chēng)為革蘭氏陰性（Gram-negative）。也有一些菌種革蘭氏染色是可變的。
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br />了解革蘭氏染色的原理，并掌握革蘭氏染色法的操作技術(shù)。
【實(shí)驗(yàn)原理】
革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法。1884 年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。
細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，再經(jīng)碘液媒染（以增加染料與細(xì)胞的親和力）后，用酒精或丙酮脫色，再用復(fù)染色劑染色。不被脫色而保持原顏色者為革蘭紙陽(yáng)性菌（G+）；被脫色后又被染上復(fù)染劑的顏色者為革蘭氏陽(yáng)性菌（G-）。此法可將細(xì)菌分為兩大類(lèi)。
革蘭氏染色的機(jī)理主要是利用兩類(lèi)細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁中含有較多的類(lèi)脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少。當(dāng)用乙醇或丙酮脫色時(shí)，類(lèi)脂質(zhì)被溶解，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染后的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)胞被脫色，經(jīng)復(fù)染后，又染上復(fù)染液的顏色；而革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁中肽聚糖的含量多且交聯(lián)度大，類(lèi)脂質(zhì)含量少，經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，因此，細(xì)胞仍保留初染時(shí)的顏色。
【實(shí)驗(yàn)材料、藥品及器具】
1、菌種 大腸桿菌（Escherichia coli）
枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）
金黃色葡萄球菌（Staphylococeus auresu）
2、染液 草酸銨結(jié)晶紫液
革蘭氏碘液
95%的酒精
藏花紅液
3、器皿洗凈的載玻片6 片、顯微鏡、酒精燈、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、鑷子、玻璃缸、瓶裝蒸餾水
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1、取培養(yǎng)12-24h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌分別涂片、固定。
2、加草酸銨結(jié)晶紫染色劑一滴，染色1 分鐘。
3、傾去染液并用洗瓶裝水輕輕沖洗。