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蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳

時(shí)間:2014/7/7閱讀:820
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一、原理:蛋白質(zhì)分子在一定的PH條件下,由于基團(tuán)解離而帶有一定的電荷,在含有緩沖液的醋酸纖維薄膜上,受電場(chǎng)作用而以一定的速度向一定的方向移動(dòng)。不同的蛋白質(zhì)分子,由于所帶的電荷不同,移動(dòng)的方向或速度不同,從而達(dá)到分離。

二、材料與試劑:電泳儀、醋酸纖維薄膜、PH8.6巴比妥緩沖液(稱取10.30g巴比妥1.84g,溶于1000ml蒸餾水中,或者稱取10.3g巴比妥鈉,加1M鹽酸8ml,加蒸餾水至1000ml)、染色液(氨基黑10B1g溶于10ml冰醋酸與90ml甲醇的混合液中)、洗滌液(冰醋酸10ml加甲醇90ml,或者甲醇50ml,冰醋酸10ml,加蒸餾水40ml)、透明液(甘油溶液,或用苯甲醇(折光率1.54),水楊酸甲酯(折光率1.54)等溶液)、微量注射器、蛋白質(zhì)樣品液

三、操作方法

1、醋酸纖維薄膜的準(zhǔn)備:將醋酸纖維薄膜切成10×2.5cm的膜條,浸于巴比妥緩沖液中約30min,充分浸透至無(wú)白點(diǎn),取出用濾紙吸去多余的緩沖液。

2、點(diǎn)樣:用微量注射器將5ul蛋白質(zhì)樣品點(diǎn)在薄膜條中央。

3、電泳:將薄膜條置于電泳儀的支架上,拉直膜條,兩端與濾紙條相接,將濾紙浸入到緩沖溶液中,緩沖液兩槽應(yīng)在同一水平面上,加蓋密封,平衡10min。接通電源,以10-25V/cm的電場(chǎng)強(qiáng)度電泳0.5-1h。

4、顯色:電泳完畢后,取出濾紙條在氨基黑染色液中染色5-10min,然后用漂洗液洗4-5次,直至區(qū)帶清晰為止。

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