污染是細胞培養技術中面臨的主要問題。由每一種細胞有其*的培養體系，因此污染造成后果也不盡相同。某些污染的發生往往難以察覺檢測，而且污染源能長期共存于培養體系中，這類染事實上大部分被人們忽視了。培養的細胞作為個生物體，會對培養環境以及環境中的污染物作相應的反應，造成培養細胞生物學特性的改變，而實驗結果造成潛在的威脅，而且隨著污染時間的長而增加。培養環境中的物理、化學及生物因素都可能入培養環境造成污染。由于入侵的微生物在培養系中不斷增殖、代謝，因此生物性的污染對細胞的害zui大。隨著污染微生物的不斷增殖，交叉污染可能性也不斷增加。此外，微生物代謝消耗大量需的養分，同時產生多種有毒的代謝產物，如酶、抗原及毒素等，進一步對細胞產生毒害作用。因此，識細胞培養污染的途徑及其危害性，建立細胞培規范的操作方法及規章制度，可以有效地防止污染保證實驗體系的穩定性和可靠性。

1、細胞培養基本技術

為了減少污染對細胞培養的影響，必須建立細胞凍存庫。細胞凍存庫應該分主細胞庫(Master cell bank， MCB) 和工作細胞庫 (Working cell bank，WCB)，當需要做實驗時從主細胞庫中復蘇細胞建立工作細胞庫。每一個凍存標本都應明確記錄細胞的性質、代數及有無污染。同時還應建立規范的檢測程序進行菌檢及細胞鑒定 。

為了保證培養細胞系的完整性，必須進行詳細的實驗記錄，應包括以下內容:細胞系的種類及來源、有無污染(如細菌，病毒，支原體) 、細胞代數和倍增時間、以及選擇性突變。詳細的記錄有利于對細胞的遺傳及生理特性在常規傳代培養中因突變、污染及各種原因導致的改變進行分析。經過連續傳代培養的細胞與它較早代數的凍存細胞相比，隨著培養時間的延長，細胞在適應環境的過程中，其生物特性已發生了改變。培養的細胞由若干生長速度及活力各異的亞群組成。隨著培養時間的延長生長速度快及活力高的細胞亞群逐漸占優勢 這種選擇性，趨勢會影響整個細胞群的生物特性。應用不同代數的細胞連續進行實驗則結果會發生偏差。建立細胞凍存庫就能避免這種影響 通過復蘇相同代數的細胞，人們就能在較為均一的條件下重復實驗。細胞培養工作需要清潔，保持良好的環境及規范的操作程序 。超凈工作臺是細胞培養中普遍使用的無菌操作裝置，它需要合理的布置及經常性的維護。超凈工作臺的工作原理是驅動經濾菌凈化后的空氣，通過工作臺面形成氣流屏障，從而阻止外界污染物的侵入并使操作過程中產生的飛沫限制在超凈工作臺中。因為操作過程中可能產生有毒的物質，所以采用垂直氣流比水平氣流安全。

當進行移液，傾倒液體的操作過程會產生飛沫并沉積在超凈工作臺內物體的表面。超凈工作臺的氣流并不能阻止飛沫的產生，飛沫會隨著氣流的方向飄浮。超凈工作臺不合理的放置、不恰當的維護以及不規范的使用會破壞超凈工作臺氣流的方向導致飛沫更廣泛的沉積。酒精燈的火焰、操作者的活動、談話、咳嗽及打噴嚏都有可能影響氣流。飛沫的沉積是導致超凈工作臺內物品污染的主要因素造成潛在污染的進一步傳播。因此為減少交叉污染的發生，應盡可能減少超凈工作臺內的物品。不同細胞系以及同一個實驗室不同操作者所使用的培養試劑一定要分開使用，如胰酶、培養液等。否則，一個操作者的失誤可能引起所有細胞發生污染。