支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(zui小直徑0.2 um)并獨立生活的微生物，約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態呈高度多形性，可為圓形、絲狀或梨形。
 
支原體形態多變，在光境下不易看清內部結構。電鏡下觀察支原體膜為三層結構，其中央有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細胞表面和細胞之間。橫斷面與細胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無顆粒群或中央束。
 
支原體代謝需固醇類物質、部分種類需要精氨酸、O2或葡萄糖，每一種支原體都有自身持點。多數支原體適合于偏堿條件下生存(pH7.6-8.0)，對酸耐受性差。對熱比較敏感，對一般抗生素不敏感。
 
支原體污染細胞后，培養液可不發生混濁。多數情況下細胞病理變化輕微或不顯著，細微變化也可由于傳代、換液而緩解。因此易被忽視。但個別嚴重者，可致細胞增殖緩慢。甚至從培養器皿脫落。
 
為確定有無支原體污染可做如下檢酗：
①相差顯微境檢測：將細胞按種于事先放置于培養瓶內的蓋玻片上，24 h后取出，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
 
②熒光染色法：熒光染色用能與DNA特異性結合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內含有的DNA著色，染色后用熒光顯微鏡觀察。具體方法如下：首先將細胞接種蓋玻片上，在細胞未長滿前取出玻片，用不合酚紅的Hanks液漂洗一下，用1: 3醋酸甲酵固定10 min，然后用生理鹽水漂洗．置于用生理鹽水配濃度為50 pg/ml的Hoechst 33258中染色10 min。染色后用蒸溜水洗1-2 min．向細胞面滴加pH5.5磷酸緩沖液數滴，然后置熒光顯微鏡下觀察。鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點。
 
③電鏡檢查；用掃描電鏡方法簡便快速．也可以利用透射電鏡。
 
④DNA分子條文檢查或支原體培養等方法：檢出率高．但方法較為復雜。