*部分 釀酒酵母培養基和培養平板配方
所有的液體培養基需用磷酸緩沖液配制：Na2HPO4-7H2O, 10.19g/L, NaH2PO4-H2O 8.56g/L. 稱量好所需組分，先把氨基酸、氮源等添加到水中，再添加糖zui后添加10X的磷酸緩沖液。液體培養基的PH需在6.25左右。
液體選擇培養基和豐富培養基可以選擇過濾除菌，但是瓊脂平板培養基必須高壓滅菌
豐富非選擇培養基
2 x (YEPD or) YPD = Yeast Extract Peptone Dextrose
20g酵母粉 yeast extract(OXOID LP0021)
40 g 蛋白胨peptone (OXOID LP0042)
40g葡萄糖 dextrose**(國藥 14434-43-7)
把除葡糖糖之外的所有組分加入500ml水中溶解，定容至900ml，高壓滅菌
配置20%的葡萄糖過濾除菌，添加100ml。
室溫保存1-2個月。
**也可以所有組分一起滅菌，但是可能會發生焦化作用，然而焦化作用不會引起任何問題。
生長選擇合成培養基(Selective growth Synthetic Media)
2x (SD – CAA)
1)用于EBY100菌株配套 pYD 系列載體，或者二配體酵母配套pPNL20 和pPNL30 載體
10 g/L 酪蛋白水解物casamino acids (-ade, -ura, -trp)(庫存貨號：Fluka A2427-250G)
40g/L 葡萄糖dextrose(國藥 14434-43-7)
14g/L YNB Yeast Nitrogen Base with ammonium sulfate w/out amino acids (SIGMA Y0626)
5.4 g/L Na2HPO4(國藥10039-32-4)
7.4 g/L NaH2PO4(國藥14431-43-7)
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2)用于YVH10 with pPNL30系列載體
10 g/L 酪蛋白水解物(casamino acids (-ade, -ura, -trp)
40g/L 葡萄糖dextrose
14g/L YNB (Yeast Nitrogen Base with ammonium sulfate w/out amino acids )40mg/L色氨酸( tryptophan)
5.4 g/L Na2HPO4
7.4 g/L NaH2PO4
3)用于JAR with pPNL20系列載體
10 g/L 酪蛋白水解物(casamino acids (-ade, -ura, -trp) (BD Bacto #223050)
40g/L 葡萄糖dextrose
14g/L YNB (Yeast Nitrogen Base with ammonium sulfate w/out amino acids ) (BD Difco 233520)
20mg/L 尿嘧啶 Uracil
5.4 g/L Na2HPO4
7.4 g/L NaH2PO4
Selective scFv (or Fab or ligand) Induction Media
抗體scFv (or Fab or 配體)的選擇誘導培養基
2x (SG-CAA)
10 g/L酪蛋白水解物casamino acids (-ade, -ura, -trp) (BD Bacto #223050)
2 g/L半乳糖 galactose
2 g/L棉子糖 raffinose
0.1 g/L葡萄糖 glucose
14g/L YNB Yeast Nitrogen Base with ammonium sulfate w/out amino acids (BD Difco 233520)
5.4 g/L Na2HPO4
7.4 g/L NaH2PO4
YEPGR or YPGR = Yeast Extract Peptone Galactose/Raffinose
10g 酵母粉yeast extract
20 g 蛋白胨peptone
2%半乳糖 galactose
2%葡萄糖 raffinose
14g/L YNB Yeast Nitrogen Base with ammonium sulfate w/out amino acids (BD Difco 233520)
5.4 g/L Na2HPO4
7.4 g/L NaH2PO4
尿嘧啶和色氨酸母液的配置
色氨酸配制成4mg/ml的100X的母液，過濾除菌
尿嘧啶配制成2mg/ml的100X的母液，過濾除菌
酵母培養基的配置和選擇
培養基的種類：應用zui廣泛的釀酒酵母培養基是YPD培養基(酵母粉、蛋白胨、葡萄糖)，單克隆在YPD上的生長通常受尿嘧啶、精氨酸和色氨酸的限制。額外的添加這些組分克隆的形成將會加快加大。合成培養基由鹽(基本氮源和硫酸胺)碳源(比如葡萄糖)和其他組分(核苷酸和氨基酸)組成。合成培養基可以用drop in” 或者“drop out” 的策略篩選特定原養型菌株
“Drop out”
這種培養基是成分確定的營養豐富的培養基，其中添加很多氨基酸和核苷酸來支持菌株的生長。菌株可以在這種培養基中快速生長，接近在YPD平板上的生長速度，“Drop out”培養基通常稱為*合成培養基，簡稱SC，缺失某一種氨基酸或者核苷酸可以選擇特定的原養型。
“Drop in”培養基僅包括基本的組分(鹽和湯)和菌株生長所需的特定氨基酸和核苷酸。菌株必須用這些需分合成大部分生長所需的前體。“Drop in”培養基通常稱為葡萄糖合成培養基，簡稱SD。簡單的組分降低了成本并且容易配置，但是克隆形成時間將會慢兩倍。并且SD培養基不易保存(4℃放置兩個月即失效)
酵母菌株可以以穿刺菌、液體飽和培養物、平板的形式保存，有些時候甚至可以保存在Whatman濾紙上。收到菌株后搖一批新鮮的菌液凍存甘油菌。雖然酵母可以在4℃平板上放置幾個月仍然可以存活，然而存活的菌株多樣性卻在下降。為了避免部分菌株的富集導致群體性質與原來相比出現偏離，接到菌株后需要馬上凍存。
在某些時間驗證至少兩個克隆的選擇標記是很有必要的。
你會注意到，有一些微小菌落(通常占群體的1 -10%)在豐富培養基上生長緩慢(在非發酵性碳源培養基中不能生長，比如葡萄糖)。這些微小菌落在YPD培養基上呈現典型的牛奶白色，而正常的克隆則呈奶油色。這種現象可以通過保存甘油菌避免
酵母菌株可以在含15%甘油的YPD中保存數年，不需在干冰/乙醇上快速冷凍。要確保冷凍前菌液和甘油培養基混合均勻。
需用新鮮培養的細胞凍存菌種，可以從固體平板上挑取菌落凍存(挑取火柴頭大小的一塊)或者取液體培養的菌株(離心取大約5 x 107 個細胞)。可以直接從選擇培養基上取菌株用YPD/甘油凍存
第二部分 酵母細胞的培養和scFv/Fab/toxin agment/ligand的誘導表達
1. 從-80取甘油菌劃SD-CAA(轉化菌或者二配體酵母)或者YPD(只限野生型菌株)，30度培養2d，挑取單克隆。接種2-5ml SD-CAA or YPD(野生型菌株培養，用于轉化)250rpm，30℃，培養過夜。
2. 過夜培養菌OD600應該在1-3之間，即使在豐富培養集中也不會超過7，在選擇培養基中不會低于1。在倒置顯微鏡中觀察菌株的狀態和是否被污染
3. 如果沒有污染菌株狀態良好，用1.5ml eppendorf 離心管13000rpm離心1-2min或者用15 ml fulcon 管3000rpm離心5min
4. 對于scFv or Fab的誘導展示，用SG-CAA重懸細胞，調整細胞密度至OD600 = 1-2，18℃，250rpm，搖24-48h。
5. 離心收集細胞，用FACS緩沖液沖洗，用Alexia 488 labeled Anti-SV5 antibody在流式細胞儀(LSA II or Aria).檢測scFv/Fab的表達
6. 對于文庫構建或者單克隆的轉化，參照LiAc 轉化方法 (part 5 or 6)