1．培養液準備：取15ml培養瓶數個，每瓶內分別充入5ml培養液（pH 7.2），內含：1640培養液（含10％～15％小牛血清），PHA 0.1ml，青霉素100單位和鏈霉素100微克/毫升 培養液 

2．抽血針管準備：取2～5ml針管一支，在消毒后的無菌操作臺或無菌操作箱中安裝好注射器，無菌抽肝素（100 U/ml BBS）少許濕潤針管，如動作迅速不用肝素亦可。 

3．采血：用棉簽75％酒精給患者或獻血者的皮膚消毒兩次，縛止血帶，靜脈取血1～2ml。無菌操作迅速向每一瓶培養中加血0.4～0.5ml，如系外出采血，安裝針管及分裝血液兩步驟亦可在無菌條件略差的環境內操作，但動作要迅速，以減少污染；在采血量不多或不應抽血的情況下，亦可在耳垂、手指肚（無名指）用刺血針采血。 

4．培養和加秋水仙素：37℃溫箱中培養到60～72小時之間，此時細胞分裂相zui多，向每培養瓶內加秋水仙素，zui終濃度0.02～0.08微克/毫升營養液，再培養4～6小時。 

5．低滲：1000轉/分鐘離心10分鐘，吸除上清液，加入預溫過的0.075M KCl溶液10ml，置溫箱中低滲處理15～20分鐘。

6．其余步驟與處理傳代細胞法相同。